Сыворотки лечебные диагностические вакцины

2. Диагностические сыворотки

В диагностике инфекционных болезней широко применяются иммунные реакции при идентификации возбудителя: при установлении родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса).

Иммунные диагностические сыворотки получают из крови животных (в основном кроликов), иммунизированных соответствующими микробами или антигенами.

Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7—8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки называется максимальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом.

Неабсорбированные агглютинирующие сыворотки обладают высоким титром — до 1: 12 800 — 1: 25 600.

Способны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.

Поэтому в настоящее время большинство агглютинирующих сывороток выпускаются адсорбированными, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содержащими только типовые или видовые антитела и соответствующими или определенному типу или виду микроорганизма.

Адсорбированные сыворотки применяют при идентификации выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле.

Преципитирующие сыворотки

Получают иммунизацией кроликов убитыми микроорганизмами, антигенами бактерий, экстрактами микробов и т. п. Иммунизация проводится длительно в течение нескольких месяцев.

Специфические преципитирующие сыворотки применяются при диагностике инфекционных заболеваний (менингит, сибирская язва, чума, туляремия, полиомиелит и др.); в судебно-медицинской практике для определения видовой принадлежности белка крови; в санитарной практике для обнаружения соответствующих белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию).

Гемолитическую сыворотку получают путем 3—4-кратной иммунизации кроликов взвесью эритроцитов барана с интервалом в 2—3 дня. Титром сыворотки называется то ее максимальное разведение, которое в объеме 0,5 мл в присутствии комплемента вызывает гемолиз 0,5 мл 3%-ной взвеси эритроцитов барана в течение часа при температуре 37°С. Титр должен быть не ниже 1 :1200—1 : 1500.

Гемолитическая сыворотка применяется в реакции связывания комплемента (РСК) в индикаторной системе (гемолитическая сыворотка—эритроциты барана).

Получают от различных животных в зависимости от вида вируса.

Так, например, сыворотку против вируса вакцины, оспы и аденовирусов получают иммунизацией соответствующими вирусами кроликов; против вируса гриппа — белых хорьков, крыс, кур, мышей; против вируса кори — морских свинок и т. п.

Необходимость строгого выбора животного для получения иммунных сывороток связана с учетом содержания в них неспецифических ингибиторов, которые подавляют активность вирусов и неспецифических агглютининов.

Поэтому перед проведением реакций обязательно освобождают иммунные сыворотки от термолабильных (прогреванием при 56°С — 30 мин.) и термостабильных (ферментированием, обработкой углекислотой и др. методами в зависимости от вида вируса) ингибиторов и проверяют на наличие неспецифических агглютининов.

Иммунные диагностические противовирусные сыворотки применяются для определения вида или типа вируса в реакциях торможения гемагглютинации (РТГА), связывания комплемента (РСК), реакции нейтрализации на лабораторных животных, в культурах клеток и развивающихся куриных эмбрионах.

Люминесцирующие сыворотки представляют собой иммунные сыворотки, содержащие специфические антитела, меченные флюоресцирующими красителями.

Микроорганизмы, обработанные люминесцирующими сыворотками, приобретают способность светиться при просмотре препаратов с помощью люминесцентных

Приготовление препаратов для люминесцентной микроскопии несложно: исследуемую взвесь, содержащую микроорганизмы, наносят на предметное стекло, высушивают, фиксируют в жидком фиксаторе (этанол, ацетон и др.), окрашивают люминесцирующей сывороткой в течение времени, указанного на этикетке ампулы с сывороткой.

Интенсивность свечения оценивается по четырехплюсовой системе:

+ + + + очень яркое свечение по периферии бактерий, контрастируемое с темным телом микроорганизма;

+ + + яркая флюоресценция периферии изучаемого микроорганизма;

+ + или + слабое свечение периферии клетки, не контрастируемое с телом бактерии.

Метод люминесцентной микроскопии широко используется для выявления патогенных микроорганизмов в патологическом материале от больного, обнаружения бактерий непосредственно в объектах внешней среды , а также при определении и титровании антител в сыворотке больных.

Люминесцентно-серологический метод (метод Кунса) для выявления микроорганизмов и антител используется в 2 модификациях: прямой и непрямой метод.

1. Прямой метод заключается в том, что исследуемый препарат обрабатывается люминесцентной сывороткой, специфической в отношении изучаемого микроорганизма. В результате образуется флюоресцирующий комплекс антиген — антитело.

2. Непрямой метод может быть использован как для вы явления бактерий, так и определения антител. Сначала проводится обычная иммунная реакция между антигенами и специфическими к ним антителами, затем этот комплекс обрабатывается люминесцирующей антисывороткой, специфичность антител которой направлена против белков сыворотки того вида животного, от которого получена иммунная сыворотка. Результатом является флюоресцирующий комплекс: антиген — антитело — антиантитело. Этот метод имеет определенное преимущество перед прямым, так как является в 10—12 раз более чувствительным и для его постановки можно в лаборатории иметь ограниченный набор люминесцирующих сывороток.

Во-первых, реакция позволяет наблюдать соединение антигена бактерий с антителами.

во-вторых, реакция является универсальной.

в-третьих, реакция характеризуется простотой приготовления препаратов и быстрым получением ответа, и, наконец, позволяет исследовать не только живые, но и погибшие микроорганизмы.

Люминесцентная микроскопия используется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний.

Источник

Вакцины, сыворотки

Еще в древности люди, описывая эпидемию, указывали: «кто перенес болезнь, был уже в безопасности, ибо дважды никто не заболевал». Задолго до цивилизации индейцы с профилактической целью втирали в кожу своих детей корочки от больных оспой. В этом случае заболевание оспой обычно протекало легко. Научное обоснование данного вопроса впервые было дано английским врачом Э. Дженнером (1749 – 1823), который готовил оспенную вакцину на телятах. После опубликования его труда в 1798 году оспопрививание быстро стало распространяться по всему миру. В России первой против оспы привилась Екатерина Вторая. С 1980 года обязательная прививка против оспы в России отменена вследствие полной ликвидации этого заболевания в стране.

В настоящее время для предупреждения инфекционных болезней методом искусственного создания невосприимчивости людей имеется большое количество вакцин и сывороток.

Вакцины – это препараты из микробных клеток или их токсинов, применение которых называется вакцинацией. Через 1-2 недели после введения вакцин в организме человека появляются антитела.

Вакцинопрофилактика – основное практическое назначение вакцин. Современные вакцинные препараты разделяются на 5 групп:

1. Вакцины из живых возбудителей с ослабленной вирулентностью (против оспы, сибирской язвы, бешенства, туберкулеза, чумы, кори, эпидемического паротита и др.). Это наиболее эффективные вакцины. Они создают длительный (на несколько лет) и напряженный иммунитет. Введенный ослабленный живой возбудитель размножается в организме, что создает достаточное количество антигена для выработки антител.

2. Вакцины из убитых микробов приготовлены против брюшного тифа, холеры, коклюша, полиомиелита и др. Длительность иммунитета 6-12 месяцев.

3. Химические вакцины – это препараты не из цельных микробных клеток, а из химических комплексов их поверхностных структур (против брюшного тифа, паратифов А и В, столбняка).

4. Анатоксины готовят из экзотоксинов соответствующих возбудителей (дифтерийный, столбнячный, стафилококковый, газовой гангрены и др.).

5. Ассоциированные вакцины, то есть комбинированные (например, АКДС – ассоциированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина).

Сыворотки чаще применяются для лечения (серотерапии) инфекционных больных и реже – для профилактики (серопрофилактики) инфекционных заболеваний. Чем раньше вводят сыворотку, тем эффективнее ее лечебное и профилактическое действие. Продолжительность защитного действия сывороток 1-2 недели. Сыворотки готовят из крови переболевших инфекционной болезнью людей или путем искусственного заражения микробами животных (лошадей, коров, ослов). Основные виды:

1. Антитоксические сыворотки нейтрализуют яды микробов (противодифтерийная, противостолбнячная, противозмеиная и др.).

2. Антимикробные сыворотки инактивируют клетки бактерий и вирусы, применяются против ряда болезней, чаще в виде гамма-глобулинов.

Гамма-глобулины из человеческой крови имеются против кори, полиомиелита, инфекционного гепатита и др. Это безопасные препараты, так как в них нет возбудителей болезней, балластных ненужных веществ. Гамма-глобулины готовят и из крови гипериммунизированных лошадей против сибирской язвы, чумы, оспы, бешенства и др. Эти препараты могут вызвать аллергические реакции.

Иммунные сыворотки содержат готовые антитела и действуют с первых минут после введения.

Интерферон занимает промежуточное положение между общими и специфическими механизмами иммунитета, так как, образуясь на введение в организм вируса одного типа, он активен и против других вирусов.

Источник

I.Диагностические препараты.

Препараты, содержащие антигены — диагностикумы, аллергены,токсины.

Препараты, содержащие антитела — диагностические сыворотки.

II.Лечебно-профилактические препараты.

Препараты, содержащие антигены — вакцины.

Препараты, содержащие антитела — лечебные сыворотки и гам­ма-глобулины и иммуноглобулины.

Интерфероны и другие цитокины.

Раздел I

Диагностические препараты используются при лабораторной диаг­ностике ряда заболеваний, точный диагноз которых может быть постав­лен только при помощи бактериологических и вирусологических иссле­дований. Кроме того, диагностические препараты необходимы при под­тверждении лабораторными методами диагноза заболевания, имеюще­го атипичное течение, либо заболевания, характеризующегося полимор­физмом симптомов. Помимо этого, диагноз заболеваний, не встреча­ющихся на данной территории и в данное время, должен быть обяза­тельно подтвержден лабораторными методами.

В диагностике инфекционных заболеваний широко применяются мик­робиологические приемы диагностирования. При этом используются бак­териологический, вирусологический, серологический, аллергический,им­мунологические методы диагностики, а также методы молекулярной гиб­ридизации и ПЦР. Для каждого из этих методов необходимы опреде­ленные диагностические иммунобиологические препараты: диагностикумы, диагностические сыворотки (видовые, типовые, комплексные, ад­сорбированные и др.), комплемент, аллергены, бактериофаги, системы для проведения РИФ и ИФА, зонды нуклеиновых кислот.

Классификация диагностических препаратов

1.Препараты, содержащие антитела — диагностические сыво­ротки:

2.Препараты, содержащие антигены:

3. Диагностические бактериофаги.

1. Диагностические сыворотки

В диагностике инфекционных заболеваний широко используют­ся иммунные реакции для идентификации микроорганизмов (бактерий и вирусов) или токсинов. Для постановки таких реакций необходимы специфичес­кие диагностические сыворотки.

1.1. Агглютинирующие сыворотки.

Агглютинирующие сыворотки получают путем иммунизации кроли­ков взвесью убитых микроорганизмов или их антигенов с последующим взятием у них крови и приготовлением сыворотки. Агглютинирующие сыворотки применяют для идентификации микроорганизмов в реакции агглютинации. Недостатком таких сывороток является то, что они спо­собны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат ан­титела к бактериям, имеющим общие антигены. Поэтому, в настоящее время большинство сывороток используется адсорбированными , Ад­сорбированные сыворотки содержат только типовые или видовые ан­титела, соответствующие определенному типу или виду антигена. Для получения таких сывороток применяют метод Кастеллани — метод ад­сорбции. Этот метод заключается в истощении сыворотки на групповые агглютинины путем насыщения ее родственными гетерогенными бакте­риями. При этом происходит адсорбция групповых антител, а специ­фические антитела остаются в сыворотке. Таким путем можно получить монорецепторные сыворотки — сыворотки, содержащие антитела толь­ко к одному антигену, и поливалентные сыворотки, дающие реакции аг­глютинации с двумя-тремя родственными бактериями, имеющими об­щий антиген. Титром агглютинирующей сыворотки называется то ее на­ибольшее разведение, при котором идет реакция агглютинации.

Агглютинирующие сыворотки широко применяют, например, при диагностике заболеваний, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и другими представителями семейства энтеробактерий.

1.2. Преципитирующие сыворотки.

Преципитирующие сыворотки получают иммунизацией кроликов ан­тигенами бактерий, их экстрактами и токсинами. Титром преципитирующей сыворотки называется то максимальное разведение антигена, при котором идет реакция преципитации. Преципитирующие сыворотки вы­пускаются с высоким титром — не менее 1:100000. Это связано с тем, что антиген, определяемый в реакции преципитации, имеет мелкодис­персную структуру и в единице объема его может содержаться больше, чем в таком же объеме сыворотки — антител.

Специфические преципитирующие сыворотки применяются при ди­агностике инфекционных заболеваний (сибирская язва, чума, туляре­мия, дифтерия, и др.), в судебно-медицинской экспертизе для определе­ния видовой принадлежности белка, в санитарной практике для обнару­жения соответствия белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию).

Реакция преципитации может быть поставлена в виде кольцепреци-питации или реакции преципитации в геле.

Гемолитические сыворотки получают путем иммунизации кроликоввзвесью эритроцитов барана. Титром сыворотки называют то ее макси­мальное разведение, которое в присутствии комплемента вызывает ге­молиз 3% взвеси эритроцитов барана. Гемолитические сыворотки ис­пользуют для титрования комплемента и при постановке реакции свя­зывания комплемента в индикаторной системе.

Иммунные противовирусные сыворотки получают путем иммуниза­ции различных животных в зависимости от вида вируса. Например, сы­воротку против аденовирусов получают иммунизацией кроликов, сыво­ротку против вируса гриппа — иммунизацией белых хорьков и т.д.

Диагностические противовирусные сыворотки используются для оп­ределения вида или типа вируса в РТГА, РСК., РН.

1.5.Люминесцирующие сыворотки. Люминесцирующие сыворотки представляют собой иммунные сы­воротки, содержащие специфические антитела, меченые флюоресциру­ющими красителями. При приготовлении люминесцирующих сыворотокпроводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной сывороткиразличных флюорохромов путем прочной химической связи. Люминес­цирующие сыворотки используют при постановке РИФ.

1.6. Анпшглобулиновые сыворотки.

Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуног­лобулинам сыворотки человека или кролика — в зависимости оттого, ка­кая иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем иммунизации животных иммуноглобулинами человека или кролика. Такие сыво­ротки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реак­ции Кумбса.

Источник