Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения

ГОСТ 28085-2013 Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности

Текст ГОСТ 28085-2013 Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

СРЕДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО

ПРИМЕНЕНИЯ

Метод бактериологического контроля стерильности

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 — 92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения)» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «8ГНКИ»)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 марта 2013 г. № 55-П)

За принятие проголосовали:

Кратхов наименование страны по МК водный. Технические условия

ГОСТ 6038-79 Реактивы. О-глюкоза. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 9871-75 Термометры стеклянные ртутные злектроконтактные и терморегуляторы. Технические условия

ГОСТ ISO 11133-1-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории ГОСТ ISO 11133-2-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред.

ГОСТ 11773-76 Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двуэамещемный. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия

ГОСТ 15300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясопептонный (для ветеринарных целей). Технические условия

ГОСТ 24104- 2001 бесы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Е Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29112-91 Среды питательные плотные (для ветеринарных целей). Общие технические условия

ГОСТ 29230-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1V. Пипетки выдувные

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Условия выполнения испытаний и требования безопасности

3.1 Условия выполнения испытаний

3.1.1 Общие требования проведения микробиологического анализа и работы с микроорганизмами Hi — IV групп патогенности — по ГОСТ ISO 7218.

3.1.2 Испытание на стерильность проводят в асептических условиях, чтобы избежать микробной контаминации во время посева, используя ламинар-бокс. бокс или чистое помещение класса «В».

3.1.3 Требования к персоналу — по ГОСТ ISO 7218 и [1).

К проведению испытаний допускаются квалифицированные сотрудники, имеющие опыт работы с микроорганизмами ill — IV групп патогенности, изучившие методики микробиологических работ.

3.2 Требования безопасности

3.2.1 Требования безопасности при работе с химическими реактивами — по ГОСТ 12.1.007. с электрооборудованием — по ГОСТ 12.1.019. Требования пожарной безопасности — по ГОСТ 12.1.004.

3.2.2 При нарушении целостности ампул (флаконов) и загрязнении препаратом поверхности стола, на котором проводят испытание, необходимо провести обработку загрязненной поверхности 70 %-ным раствором этилового спирта по ГОСТ 18300. раствором хлорамина Б содержанием активного хлора АХ не менее 26 %, 6 %-ным раствором перекиси водорода по ГОСТ 177 или другими дезинфицирующими средствами, обеспечивающими уничтожение микроорганизмов III — IV групп патогенности.

4 Сущность метода

Сущность метода бактериологического контроля стерильности и определения контаминации заключается в микробиологической оценке наличия бактерий, грибов и миколлазм в высевах лекарственных средств на питательные среды.

5 Средства измерений, аппаратура, материалы, реактивы и культуральные среды

5.1 Для проведения испытания применяют:

• весы со значением среднего квадратического отклонения (СКО). не превышающим 0.03 мг и с погрешностью от нелинейности не более ± 0.06 мг по документации изготовителя или весы лабораторные по ГОСТ 24104;

• шкаф сушильный лабораторный с диапазоном автоматически поддерживаемой температуры нагрева от 50 й С до 200 °С; погрешность стабилизации температуры в рабочей камере при установившемся режиме ± 3 в С;

• термометры ртутные стеклянные электроконтактныв с диапазоном измерения температуры

от 50 *С до 200 и ценой деления 1 в С по ГОСТ 9871;

— термометры максимальные типа СП-83 М с диапазоном измерения температуры от 50 °С до 250 °С и ценой деления 1 °С;

• шкаф ламинарный II класса биологической опасности;

— термостат электрический с автоматическим терморегулятором, обеспечивающий поддержание температуры нагрева от 20 °С до 55 °С по ГОСТ ISO 7218;

• pH-метр с точностью калибровки ± 0.1 ед. pH при температуре от 20°С до 25°С по ГОСТ ISO 7218;

• штативы для пробирок металлические или из полимерных материалов;

• холодильник бытовой по ГОСТ ISO 7218;

• пипетки мерные вместимостью 1 и 2 см 3 по ГОСТ 29230;

• флаконы стеклянные вместимостью 100 и 200 см 3 ;

• пробирки стеклянные по ГОСТ 25338;

— воронки стеклянные по ГОСТ 25336;

• фильтры для мембранной фильтрации;

• бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;

— воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

• натрий хлористый по ГОСТ 4233;

— натрий углекислый по ГОСТ 83;

• натрия гидроокись по ГОСТ 2263;

— натрия гидрофосфат по ГОСТ 11773;

— калий хлористый по ГОСТ 4234;

• калия дигидрофосфат по ГОСТ 2493;

• магний сернокислый по ГОСТ 4523;

— магний хлористый по ГОСТ 4209;

• кальция хлорид безводный;

— калий йодистый по ГОСТ 4232;

• аммиак водный по ГОСТ 3760. раствор массовой долей 10 %;

• кислоту соляную по ГОСТ 3118, раствор массовой долей 1 % — 2 %;

• водорода перекись по ГОСТ 177. раствор массовой долей 3 % и 6 %;

• йод кристаллический по ГОСТ 4159;

• D-глюкозу по ГОСТ 6038;

• масло вазелиновое по ГОСТ 3164;

• хлорамин, раствор массовой долей 26 %;

• фенол, раствор массовой долей 3 %;

— известь хлорную массовой долей активного хлора не менее 32 %;

• агар мясо-пептонный массовой долей глюкозы 0.5 % (МПА) по ГОСТ 29112;

• бульон мясо-пептонный массовой долей глюкозы 0.5 % (МПБ) по ГОСТ 20730;

• бульон мясо-пептонный печеночный под вазелиновым маслом массовой долей глюкозы 0.5 %. агара 0.2 % (среда Китт-Тарощи);

• среды для обнаружения микоплазм:

среду Хейфлика; среду Фрея;

• агар микробиологический по ГОСТ 17206:

• пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805:

• казеина гидролизат панкреатический или пептон Мартена:

• раствор цистеина гидрохлорида концентрацией 10 г/дм 3 :

• кислоту дезоксирибонуклеиновую, стерильный раствор концентрацией 2 г/дм 3 :

• пенициллин концентрацией 20000 МЕ/см 3 :

• раствор Р-Никотинамидадениндинуклеотда концентрацией 10 г/см 3 :

•0.9 %-ный раствор натрия хлорида изотонический:

• экстракт мозга теленка;

• сыворотку лошадиную стерильную;

• муки соевой гидролизат;

5.2 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже указанных.

5.3 Допускается использование готовых и сухих питательных сред, предназначенных для указанных целей, а также сред, приготовленных по прописи производителя.

5.4 Вместо оборудования и материалов многократного использования (чашек Петри, пипеток, пробирок, флаконов, бутылок) может использоваться одноразовое оборудование и материалы, если они аналогичны по техническим характеристикам, подходят для использования в микробиологии и не содержат веществ, подавляющих рост микроорганизмов.

6 Отбор и подготовка проб для испытания

6.1 Для испытания отбирают пробы лекарственного средства в количестве, указанном в таблице 1. если нет других указаний в нормативном документе на конкретное лекарственное средство.

Таблица 1 — Количество образцов (ампул, флаконов) для проведения анализа от серии

Количество единиц в серии

Количество единиц для проведения анализа, не менее

10 % или 4 шт. (берут наибольшее)

2 % или 20 шт. (беоут наименьшее)

При вскрытии пробы не допускают его контаминацию микроорганизмами, которые могут находиться на его внешней поверхности. Ампулы и пробки флаконов протирают 70 %-ным ректификованным этиловым спиртом и фламбируют.

6.2 Пробы сухих лекарственных средств предварительно разводят стерильным растворителем (0.9 %-ным изотоническим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой, если не указано другого в нормативном документе на конкретное лекарственное средство) до первоначального объема, указанного на этикетке.

6.3 Высев жидких лекарственных средств проводят непосредственно из каждого флакона или ампулы.

6.4 Для посева на каждую питательную среду используют количество исследуемой пробы, приведенное в таблице 2. если нет других указаний в нормативном документе на конкретное лекарственное средство.

Таблица 2 — Минимальное количество пробы для посева на питательные среды

Количество лекарственного средства в упаковке,

Количество пробы для посева, см 3

Уз содержимого, но не менее 1

Примечание — Объем питательной среды для посева должен в 10 раз превышать объем пробы.

7 Подготовка к испытанию

7.1 Подготовка лабораторной посуды

7.1.1 Новую стеклянную лабораторную посуду кипятят в течение 15 мин в дистиллированной воде, подкисленной раствором соляной кислоты, затем промывают водопроводной водой и моют ершом в мыльно-содовом растворе по 7.3.2. После этого посуду тщательно промывают сначала водопроводной водой, а затем три раза дистиллированной водой, высушивают и стерилизуют.

7.1.2 Стерилизуют посуду в автоклаве при 0,15 МПа в течение 60 мин или сушильном шкафу при температуре (170 ± 5) °С в течение 120 мин.

7.2 Подготовка бокса

7.2.1 Ежедневно бокс и предбоксник подвергают тщательной уборке и дезинфекции 3 %-ным раствором перекиси водорода или другими средствами аналогичного действия с соблюдением требований техники безопасности.

Норма расхода дезинфицирующего раствора 7-100 см 3 /м 2 при влажной уборке. Раствор готовят непосредственно перед применением.

7.2.2 Допускается дезинфицировать бокс горячим мыльно-содовым раствором температурой 50 °С — 60 °С по 7.6.2 или антисептолом по 7.3.1. В каждом боксе должны быть установлены бактерицидные лампы из расчета 2.G — 2.5 8 на 1 м 3 . Лампы размещают на потолке и на стенах. Бокс облучают до начала проведения испытания в течение 1.5 — 2.0 ч. Во время проведения испытания лампы должны быть выключены.

7.2.3 Чистоту воздуха в боксе проверяют один раз в неделю, используя аппараты, предназначенные для этих целей (аппарат Кротова и др.) или методом экспозиции чашек Петри с твердыми питательными средами (МПА. МПБ. среда Сабуро) с последующим культивированием в термостате при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч и определением количества выросших колоний и видовой принадлежности микроорганизмов (седиментационный метод).

7.2.4 Допускается применять другие методы проверки обсемененности воздуха микроорганизмами, например аспирационный метод, представляющий собой исследование проб воздуха объемом до 100 м 3 посредством просасывания воздуха через фильтры с последующим выделением и высевом микроорганизмов по 7.2.3.

7.2.5 Допускается наличие не более трех колоний на чашке Петри при исследовании седиментационным методом и не более 500 КОЕ/м 3 при исследовании аспирационным методом. При превышении указанных значений обсемененности воздуха в боксе работу прекращают и проводят комплекс санитарно-гигиенических мероприятий с последующим контролем микробной обсемененности воздуха.

7.3 Приготовление антисептических растворов

7.3.1 Приготовление раствора антисептола

Для приготовления раствора антисептола берут раствор хлорной извести массовой долей 50 % и раствор кальцинированной ооды массовой долей 5 %, сливают в равных объемах и перед применением разбавляют водопроводной водой в соотношении 1:50.

7.3.2 Приготовление мыльно-содового раствора

Для приготовления мыльно-содового раствора берут 10 г соды. 10 г стирального порошка и 5

см 3 нашатырного спирта, растворяют в 1 дм 3 водопроводной воды.

7.4 Общие требования, предъявляемые к приготовлению и хранению питательных сред

7.4.1 Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления, а также испытанию микробиологических критериев качества, ростовых и селективных свойств питательных сред — по ГОСТ ISO 11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.

7.4.2 Готовить питательные среды следует строго придерживаясь приведенной рецептуры, а сухие питательные среды — согласно инструкции по применению организации-производителя. Необходимый pH питательных сред устанавливают при температуре (25 ± 2)°С. Среды стерилизуют в автоклаве в течение 15 мин при температуре 121 °С. если нет других указаний в нормативном документе на конкретное лекарственное средство.

7.4.3 После стерилизации не менее 5 % пробирок или чашек от каждой партии питательной среды помещают в термостат и инкубируют в течение 14 сут. параллельно с посевом на стерильность.

7.5 Приготовление питательных сред

7.5.1 Приготовление смеси витаминов

Для приготовления смеси витаминов берут 100 мг биотина. 100 мг пантотената кальция. 100 мг хлорида холина. 100 мг фолиевой кислоты. 200 мг i-Инозига. 100 мг никотинамида. 100 мг гидрохлорида пиридоксина, 10 мг рибофлавина. 100 мг гидрохлорида тиамина, смешивают в стерильных условиях и доводят объем раствора стерильной дистиллированной водой до 1000 см*. Готовую смесь стерилизуют автоклавированием в течение 10 — 15 мин при 110 °С. Используется как комлснент при приготовлении среды Фрея.

Срок хранения смеси витаминов в защищенном от света месте при комнатной температуре -не более 1 мес.

7.5.2 Приготовление бульона экстракта говяжьего сердца

Для приготовления бульона экстракта говяжьего сердца смешивают 500 г говяжьего сердца. 10 г ферментативного пептона. 5 г хлорида натрия, доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см*, стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Используется как компонент для приготовления среды Хейфлика.

7.5.3 Приготовление сбалансированного солевого раствора Хэнкса (модифицированного)

Для приготовления сбалансированного модифицированного солевого раствора Хэнкса берут

6.4 г хлорида натрия. 0,32 г хлорида калия. 0.08 г сульфата магния. 0.08 г хлорида магния. 0.112 г безводного хлорида кальция. 0.0596 г гидрофосфат дигидрата натрия. 0.0048 г безводного дигидрофосфата калия и доводят объем раствора дистиллированной водой до 800 см*.

Стерилизуют методом мембранной фильтрации, изложенным в разделе 9.

Используется как компонент для приготовления среды Фриса.

7.5.4 Приготовление бульона из экстракта сердца и мозгов

Для приготовления бульона из экстракта сердца и мозгов берут 200 г экстракта мозга теленка. 250 г экстракта говяжьего сердца. 10 г ферментативного пептона. 2 г моногидрата глюкозы. 5 г хлорида натрия. 2.5 г безводного гидрофосфата натрия и доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см*. Стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Используется для приготовления среды Фриса.

7.5.5 Приготовление бульона PPLO

Для приготовления бульона PPLO берут 50 г экстракта говяжьего сердца. 10 г ферментативного пептона. 5 г хлорида натрия и доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см*. Стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Используется для приготовления среды Фриса.

7.5.6 Приготовление жидкой тиогликолееой среды

Для приготовления жидкой тиогликолееой среды берут 0.50 — 0.75 г (.-цистеина. 0.75 г гранулированного агара массовой долей влаги не более 15 %. 2.5 г хлорида натрия. 5.0 г моногидрата глюкозы. 5.0 г водорастворимого дрожжевого экстракта. 15,0 г панкреатического гидролизата казеина, тиогликолееой кислоты. 0.3 см* или тиогликолята натрия. 0.5 — 0.75 см*, доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см* и нагревают до полного растворения. Затем добавляют 1.0 см* свежеприготовленного раствора реэазурина натрия (1 :1000). перемешивают и разливают в пробирки соответствующего объема. Среду автоклавируют при температуре 121 °С в течение 15 мин. pH среды после стерилизации (7.0 ± 0.2).

7.5.7 Приготовление жидкой соево-казеиновой среды

Для приготовления жидкой соево-казеиновой среды берут 17.0 г панкреатического гидролизата казеина. 3.0 г гидролизата соевой муки. 5.0 г хлорида натрия. 2.5 г хлорида калия. 2.5 г калия фосфата двуэамещенного. 2.5 г глюкозы, доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см 3 и нагревают до полного растворения. Охлаждают до комнатной температуры. Если требуется, добавляют 1 моль/дм 3 раствор едкого натра, чтобы pH после стерилизации был 7.3 ± 0.2. Фильтруют для получения прозрачной среды, разливают по пробиркам и стерилизуют е автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

Для получения агариэованной питательной среды к приготовленной жидкой соево-казеиновой среде добавляют 10 — 20 г агара.

7.5.8 Приготовление жидкой среды Сабуро

Для приготовления жидкой среды Сабуро в 1000 см 3 дистиллированной воды добавляют 10 г сухого ферментативного пептона, кипятят в течение 10 мин. фильтруют, прибавляют 40 г

глюкозы, устанавливают соляной кислотой массовой долей 1 % — 2 % pH (S.6 ± 0,2). разливают в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

Для получения агаризованной питательной среды к приготовленной жидкой среде Сабуро добавляют 10 — 20 г агара.

7.5.9 Приготовление среды Хейфлика

7.5.9.1 Для приготовления жидкой среды Хейфлика готовят основу среды: берут 90.0 см 3 бульона из экстракта говяжьего сердца. 10.0 см 3 дрожжевого экстракта концентрацией 250 г/дм 3 . 5.0 см 3 раствора фенолового красного концентрацией 0.6 г/дм 3 , доводят до кипения и кипятят в течение 10 мин. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

7.5.9.2 Затем основу среды охлаждают до температуры 40 0 С — 45 °С и добавляют 20.0 см 3 стерильной лошадиной сыворотки, не подвергнутой нагреву и проверенной на контаминацию микоплаэмами. 1,20 см 3 стерильного раствора дезоксирибонуклеиновой кислоты концентрацией 2 г/дм 3 и 0,25 см 3 пенициллина с содержанием пенициллина 20000 МЕ/см 3 . Значение pH доводят до 7.8 раствором едкого натра массовой концентрацией 10 %. Среду не стерилизуют.

7.5.9.3 Для приготовления твердой среды к основе жидкой среды Хейфлика no 7.5.9.1 добавляют агар в концентрации 15 г/дм*, стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. охлаждают до температуры 40 0 С -45°С. а затем добавляют компоненты по 7.5.9.2.

7.5.10 Приготовление среды Фрея

Среда рекомендуется для обнаружения Mycoplasma Synowiae.

Для приготовления жидкой среды Фрея смешивают 90.0 см 3 бульона из экстракта говяжьего сердца. 2.0 см 3 раствора моногидрата глюкозы концентрацией 500 г/дм 3 . 12,0 см 3 свиной сыворотки, инактивированной при 56 °С в течение 30 мин. 5.0 см 3 раствора фенолового красного концентрацией 0.6 г/дм 3 . Стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин, охлаждают до температуры 40 0 С — 45 °С. а затем добавляют 0.25 см 3 пенициллина (20000 МЕ/см 3 ), 0.025 см 3 смеси витаминов по 7.5.1,1.0 см 3 раствора Р-Никотинамидадениндинуклеотда концентрацией 10 г/см 3 и 1.0 см 3 раствора цистеина гидрохлорида концентрацией 10 г/дм 3 . Значение pH среды доводят до 7.8 добавлением раствора едкого натра массовой концентрацией 10 %.

Для приготовления твердой среды Фрея смешивают 90.0 см 3 бульона из экстракта говяжьего сердца. 2.0 см 3 раствора моногидрата глюкозы концентрацией 500 г/дм 3 . 12.0 см 3 свиной сыворотки, инактивированной при 56 °С в течение 30 мин. 5.0 см 3 раствора фенолового красного концентрацией 0.6 г/дм 3 . 1,4 г очищенного агара, значение pH доводят до 7.8. стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. затем охлаждают до температуры 40 0 С — 45 °С и добавляют 0,25 см 3 пенициллина (20000 МЕ/см 3 ). 0.025 см 3 смеси витаминов. 1.0 см 3 раствора (J* Никотинамидаденикдинуклеотда концентрацией 10 г/см э и 1.0 см 3 раствора цистеина гидрохлорида концентрацией 10 г/дм 3 .

7.5.11 Приготовление среды Фриса

Среда рекомендуется для обнаружения микоплаэм, кроме птичьих.

Для приготовления жидкой среды Фриса берут 800 см 3 сбалансированного модифицированного солевого раствора Хенкса. 67 см 3 дистиллированной воды. 135 см 3 экстракта из сердца и мозгов. 248 см 3 бульона PPLO. 60 см 3 дрожжевого экстракта концентрацией 170 г/дм 3 . 250 мг бацитрацина. 250 мг метициллина, 4.5 см 3 фенолового красного концентрацией 5 г/дм 3 . Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. затем охлаждают до температуры 40 “ С — 45 °С. значение pH доводят до 7.40 — 7,45 и добавляют стерильно 165 см 3 лошадиной сыворотки. 165 см 3 свиной сыворотки, проверенных на контаминацию микоплазмами.

Для приготовления твердой среды Фриса смешивают 800 см 3 сбалансированного модифицированного солевого раствора Хенкса. 200 мг DEAE — декстрана и 15.65 мг очищенного агара. Полученную смесь стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и добавляют к 1740 см 3 жидкой среды Фриса.

7.6 Условия хранения питательных сред

7.6.1 Сроки и условия хранения культуральных сред — по ГОСТ ISO 11133-1.

7.6.2 Жидкие питательные среды промышленного производства, готовые к употреблению, хранят в плотно укупоренных сосудах при условии сохранения их стерильности и ростовых свойств в течение срока годности, указанного производителем.

7.6.3 Сухие питательные среды промышленного производства хранят в сухом, защищенном от света месте в соответствии с инструкцией производителя. После вскрытия упаковки необходимо написать дату вскрытия и далее хранить при комнатной температуре до окончания срока годности. По истечении срока годности, указанного производителем, среды уничтожают.

7.6.4 Приготовленные из сухих смесей и разлитые во флаконы питательные среды хранят в течение 1 мес при комнатной температуре или 3 мес при температуре от 2 °С до 8 °С. Срок годности питательных сред, разлитых в чашки Петри, составляет 7 сут при температуре 2 °С до 8 °С.

7.6.5 Если при хранении тиогликолееой среды, содержащей резазурин. верхний слой среды (более 173 объема) окрасится в розовый цвет, то среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной бане в течение 10 — 15 мин до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением. Если окраска не исчезает после нагревания, то среду считают не пригодной к употреблению. Регенерацию среды можно проводить только один раз.

7.7 Определение ростовых свойств питательных сред

7.7.1 Определение ростовых свойств проводят для каждой партии коммерческой среды (сухой и готовой к использованию), а также для каждой партии среды, изготовленной в лаборатории.

7.7.2 При испытании ростовых свойств питательных сред, используемых для определения бактерий и грибов, в две пробирки со средой вносят культуру тест-штамма, каждого отдельно, согласно таблице 3 в количестве 10 — 100 КОЕ.

Таблица 3 — Тест-микроорганизмы для проверки ростовых свойств питательных сред. испол^вмых_для^п£еделения_бакте£ий₁₁ГЕибо8_и_микоплаэк^_^^^^^^^^^_^^^^^^^_

Источник