Пирогенность лекарственных средств что это

Приложение F (справочное). Информация по пирогенам, опосредованным материалом

Информация
по пирогенам, опосредованным материалом

Пирогенность — это способность химического агента или другого вещества вызывать лихорадочную ответную реакцию. Пирогенные реакции могут быть опосредованы материалом, эндотоксином или другими веществами, такими как составляющие грамположительных бактерий и грибов. Настоящий стандарт относится к пирогенности, опосредованной материалом.

Исследование всех новых медицинских изделий на пирогенность in vivo не является необходимым. Тем не менее, материалы, содержащие новые химические соединения или вещества, которые ранее вызывали пирогенный ответ, должны быть оценены на предмет пирогенности, опосредованной материалом. Контаминация эндотоксинами может быть источником пирогенной реакции, которую следует отличать от пирогенной реакции, опосредованной материалом.

Пирогенность, опосредованная эндотоксином

Пирогенность этого типа, вызванная биологически активным эндотоксином грамотрицательных бактерий, являющимся примесью процесса производства медицинских изделий, обычно вызывает повышение температуры. Оценивается путем измерения количества эндотоксина в изделиях эндотоксин-специфичным LAL (лизат амебоцитов мечехвоста)-тестом без проведения исследования на кроликах(а).

Пирогенность, опосредованная материалом

Пирогенность этого типа возникает по причине факторов, не связанных с эндотоксинами. Ниже приводится список веществ, о которых известно, что они вызывают пирогенную реакцию, не будучи эндотоксинами:

— эндогенные пирогены (например, IL-1, IL-6, TNF , INF- );

— индукторы (например, полиадениловая, полиуридиловая, полибионосиновая и полирибоцитидиловая кислоты);

— вещества, нарушающие функцию терморегулирующих центров (например, ЛСД, кокаин, морфий);

— разъединяющие агенты оксидативной фосфориляции (например, 4, 6-динитро-о-крезол, динитрофенол, пикриновая кислота);

— N-фенил- -нафтиламин и альдо- -нафтиламин (механизм лихорадки неизвестен);

— бактериальные экзотоксины (например, TSST-1, SEA, Spe F, Spe С);

— нейромедиаторы (например, норадреналин, серотонин);

— в некоторых случаях такие металлы, как соли никеля.

Для определения пирогенности, обусловленной материалом, в настоящее время рекомендуется исследование пирогенности на кроликах, которое имеет широкий диапазон обнаружения пирогенной активности. Методы проведения исследования пирогенности на кроликах приводятся по Фармакопее США, Европейской Фармакопее, Японской Фармакопее. LAL-тест не является применимым для определения пирогенности этих веществ. В случае разработки и утверждения других методов определения неэндотоксиновой пирогенности таковые будут рассмотрены в качестве замены исследования на кроликах.

Новой разработкой являются пробы, основанные на цитокинном выбросе моноцитами/макрофагами, которые способны обнаружить пирогенность, связанную с составляющими грамотрицательных и грамположительных бактерий и грибов. Эти пробы не утверждены для определения пирогенности, опосредованной материалом.

(а) LAL-тест: AAMI/ST72 — Бактериальный эндотоксин — Методологии исследования, регулярный контроль и альтернативы серийным исследованиям.

LAL Testing: AAMI/ST72 — Bacterial Endotoxin — Test methodologies, routine monitoring, and alternatives to batch testing.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Источник

Пирогенность лекарственных препаратов

Стерильные инъекционные растворы могут вызывать повышение температуры тела (пирогенный эффект), что связано с наличием в них убитых бактерий или продуктов их распада. Поэтому дистиллированная вода для приготовления инъекционных растворов не должна содержать в 1 мл более 10-15 бактерий, а лекарственные препараты для парентерального введения должны подвергаться контролю не только на стерильность, но и на пирогенность, (от греч. руг — огонь, genes — рождающий) — способность некоторых веществ при парентеральном введении вызывать повышение температуры тела, озноб, обильное потовыделение, головную болью, тошноту, учащением пульса. Тяжелые лихорадочные состояния могут иметь летальный исход.

Выделяют экзогенные (бактериальные липополисахариды) и эндогенные (клеточно-тканевые — некоторые белки или продукты лейкоцитов) пирогены. Пирогены термостабильны, имеют малые размеры (1-50 нм), легко проходят через бактериальные фильтры, растворимы в воде, но нерастворимы в спирте и ацетоне, чувствительны к действию перекиси водорода, перманганата калия, отличаются высокой биологической активностью. Стерилизация сухим воздухом при температуре 160 0 С в течение 2 ч не гарантирует освобождение стерилизуемого объекта от пирогенов. Нагревание в автоклаве при 120 0 С приводит к гибели микроорганизмов, но не к разрушению пирогенов. Удалить пирогены чрезвычайно сложно, поэтому необходимо соблюдать условия, исключающие возможность микробной контаминации парентеральных растворов, предупреждая таким способом возникновение пирогенной реакции.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Анализ микробной загрязнености растительного лекарственного сырья (демонстрация). 1 г сырья помещают в стерильную пробирку с 5 мл изотонического раствора хлорида натрия, встряхивают на шуттель-аппарате в течение 10 минут. Из полученного смыва готовят разведе­ния 1:10 и 1:100, из каждого разведения делают посев 1 мл в глубину питательной среды (Сабуро или сусло-агар для выявления грибов, МПА для обнаружения бактерий) в чашках Петри (2-3 чашки на каждое разведение). Инкубируют в термостате (24 0 С — для дрожжей и грибов и 37 0 С — для бактерий), подсчитывают количество выросших колоний и, зная разведение смыва, определяют микробную загрязненность сырья. Студентам необходимо определить общее число бактерий в демонстрационных посевах лекарственного сырья.

Источник

Современные подходы к определению пирогенов. Обеспечение апирогенности лекарственных форм

Вы будете перенаправлены на Автор24

Пирогенность – это свойство химических агентов и других веществ, которое проявляется в способности вызывать в организме реакцию лихорадки.

Свойства пирогенов и их классификация

Пирогены – это вещества, которые вызывают устойчивое повышение температуры тела при поступлении их в организм из окружающей среды или образовании непосредственно в нем.

Пирогены могут быть:

• первичными (экзогенными);
• вторичными (эндогенными).

Лихорадочная реакция запускается вторичными пирогенами, которые высвобождаются при действии нейтрофилов и макрофагов.

Что касается экзогенных пирогенов, то они могут иметь инфекционную и неинфекционную природу. Это происходит потому, что они являются продуктами метаболизма бактерий (патогенных и непатогенных) и влияют непосредственно на терморегуляционный центр внутри организма. Такой пирогенный эффект называется опосредованным, поскольку он реализуется путем образования в организме вторичных пирогенов.

К самым известным и изученным пирогенам относят липополисахариды, которые выделяются из стенок грамотрицательных бактерий. Такими же способностями обладают метаболиты стероидных гормонов, двуспиральная интерфероногенная РНК, хемотоксические пептиды. Все указанные вещества оказывают эффект высвобождения из лейкоцитов вторичных пирогенных веществ. К ним относят простагландины и интерфероны.

Экзогенные пирогены – это пирогенные вещества, выделяемые микроорганизмами в процессе своей жизнедеятельности или освобождающиеся при их распаде. Пирогенной активностью обладают почти все патогенные бактерии, многие вирусы и грибки, патоггенные микроорганизмы.

Экзогенные пирогены являются для организма чужеродными агентами, поэтому они подлежат нейтрализации при помощи гранулоцитов и клеткок иммунной памяти. Они вступают во взаимодействие с пирогенами и высвобождают из лейкоцитов вторичные пирогенные вещества.

Готовые работы на аналогичную тему

В дальнейшем лейкоцитарные пирогены воздействуют на центральную нервную систему и тормозные интернейроны, которые расположены в передней области гипоталамуса на мембранах со специфическими рецепторами. Такие рецепторы взаимодействуют с пирогенами и активируют аденилатциклазную систему, тем самым повышая содержание в клетках цАМФ (цикличного адензинмонофосфата). Это вещество меняет чувствительность терморегуляционного центра в отношении холодовых и тепловых сигналов.

Апирогенность лекарственных форм

Одним из наиболее важных требований, которые предъявляются к качеству лекарственных средств, является апирогенность.

Апирогенность – это отсутствие в инъекционных растворах продуктов метаболизма микроорганизмов — так называемых пирогенных веществ, или пирогенов.

В первую очередь апирогенными должны быть растворы для инъекций. Источником пирогенных агентов внутри лекарственных препаратов часто являются грамотрицательные бактерии, грибы и вирусы. Также оказать пирогенное воздействие могут некоторые химические вещества. Примером являются нуклеинат натрия, продукты распада пластмасс.

Медицинские растворы, которые предназначены для внутривенного введения могут вызвать лихорадочную реакцию, если в них имеются убитые бактерии и продукты их распада. Чтобы избежать подобной ситуации, в дистиллированной воде, которая используется для инъекций, число бактерий в 1 мл не должно превышать 10-20 шт.

Готовые формы лекарственных препаратов, которые предназначены для парентерального введения помимо контроля на стерильность подвергаются к проверке на пирогенность, чтобы избежать возникновения тяжелого лихорадочного состояния.

Обеспечение апирогенности лекарственных форм

Пирогенная реакция может иметь различную степень выраженности, поэтому ее влияние на состояние здоровья может быть незначительным или критическим, вызывающим летальный исход. В связи с этим фармацевтическая и медицинская науки вырабатывают целый ряд методов, которые блокируют пирогенность лекарственных препаратов.

• обязательный контроль лекарственных препаратов на наличие в их составе пирогенов или эндотоксинов бактерий;
• биологический тест на присутствие пирогенов при помощи испытаний на кроликах;
• бактериологический тест на присутствие эндотоксинов с помощью так называемого ЛАЛ-теста (лимулус-амебоцитного лизата.

Что касается метода контроля на кроликах, то он официально разрешен и применяется с начала сороковых годов двадцатого века. Он обеспечивает систему безопасности в отношении пирогенности многочисленных лекарственных препаратов. Но у этого метода имеются ограничения и отрицательные стороны. Он может применяться только как разрешающий и запрещающий тест, поскольку имеет качественный характер.

Кроме того, его результаты находятся в существенной зависимости от индивидуальных особенностей конкретного организма, его ситуативного состояния на момент тестирования. Также этот метод не дает возможности проверять некоторые группы лекарственных средств. В них входят, например, седативные препараты.

Количественная оценка возможности пирогенного действия лекарственных препаратов стала более реальной с 80 -ых годов двадцатого столетия при введении ЛАЛ – теста. Он фактически заменил тестирование на кроликах. В его основе лежит способность лизата амебоидных клеток реликтовых животных мечехвостов оригинальным образом реагировать на эндотоксические вещества грамотрицательных бактериальных клеток.

Наиболее распространенные методики ЛАЛ-теста: гель-тромб тест; кинетико-турбидиметрический количественный метод; хромогенный метод; колориметрический метод. Таким образом, можно сделать вывод о том, что исследования пирогенности лекарственных препаратов сегодня вышли на новый уровень, стали более качественными, обоснованными с количественной точки зрения и безопасными для исследователя. Проверка пирогенности лекарственных средств входит в обязательную систему проверки препаратов, принятую в современной фармацевтической промышленности.

Источник

ОФС.1.2.4.0005.15 Пирогенность

Содержимое (Table of Contents)

ОФС.1.2.4.0005.15 Пирогенность

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Пирогенность ОФС.1.2.4.0005.15

Взамен ГФ XII, ч.1, ОФС42-0061-07

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на испытание пирогенности инъекционных растворов и фармацевтических субстанций, из которых они изготавливаются. Испытание основано на измерении температуры тела у кроликов до и после инъекции.

Содержание животных и подготовка их к проведению испытания

Каждого кролика содержат в отдельной клетке на полноценном пищевом рационе, ограждая от раздражающих воздействий (акустических, оптических и других). В помещениях, где находятся животные и проводятся испытания, поддерживают постоянную температуру воздуха 20 ± 3 ºС. Перед испытанием проводят осмотр животных и отбирают здоровых кроликов одного пола, не альбиносов, с массой тела от 2,0 до 3,5 кг, которые не теряли в массе в течение предыдущей недели.

За 18 часов до испытания кроликов лишают корма без ограничения воды. Во время опыта животные не получают ни корма, ни воды. Кроликов, впервые предназначенных для опыта или не участвовавших в опыте более четырех недель, предварительно готовят к процедуре испытания, осуществляя все рабочие операции (осмотр, взвешивание, измерение температуры тела) за исключением инъекции.

Кролики, ранее бывшие в опыте, могут быть использованы повторно через трое суток, если введенное им лекарственное средство было апирогенным. При повышении температуры тела у животного на 0,6 ºС и более, кролик может быть использован для дальнейших опытов не ранее, чем через две недели.

Если испытуемое лекарственное средство обладает антигенными свойствами, то порядок повторного использования животных для испытаний указывают в фармакопейной статье.

Материалы и оборудование

Посуда для разведения, шприцы и иглы для инъекций должны быть стерильными и апирогенными, что обеспечивается нагреванием при температуре 250ºС в течение 30 минут или 200ºС в течение 60 минут.

Для разведения испытуемых лекарственных средств используют 0,9 % раствор натрия хлорида для инъекций, если в фармакопейной статье не указан другой растворитель. Все растворители должны быть стерильными и апирогенными.

Ректальную температуру у кроликов измеряют с точностью до 0,1ºС медицинским максимальным ртутным или электронным термометром с термочувствительным датчиком. Термометр или датчик вводят в прямую кишку кролика на глубину от 5 до 7,5 см в зависимости от массы тела животного.

Введение испытуемого лекарственного средства

Испытуемое лекарственное средство вводят в ушную вену кролика, если в фармакопейной статье не указан другой путь введения. Объем инъецируемого раствора должен составлять не менее 0,2 мл и не более 10 мл на 1,0 кг массы тела животного. Перед введением раствор подогревают до температуры 37,0 ± 2ºС.

Тест-дозу испытуемого лекарственного средства, объём вводимого раствора и, если необходимо, скорость введения указывают в фармакопейной статье.

Проведение испытания

Испытание лекарственного средства проводят на группе из трех кроликов с исходной температурой 38,5-39,5 ºС.

Перед опытом, с интервалом не менее 30 минут, у каждого кролика дважды измеряют температуру тела. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2ºС. В противном случае кролика исключают из испытания. За исходную температуру принимают величину последнего результата измерения.

Раствор испытуемого лекарственного средства вводят животным сразу после второго измерения температуры.

Измерения температуры после внутривенного введения испытуемого лекарственного средства проводят с интервалом не более 30 минут на протяжении трех часов. При других путях парентерального введения – на протяжении пяти часов.

Учет результатов

Испытание лекарственного средства можно проводить поэтапно. На каждом этапе используют трех кроликов. Максимальное число этапов не должно превышать четырех.

По окончании каждого из этапов испытания определяют максимальное изменение температуры (Dt) тела каждого кролика по сравнению с исходным значением. Изменение температуры тела животного ниже исходной величины принимают за нулевое и не учитывают.

Для трех кроликов определяют сумму индивидуальных максимальных повышений температур (S Dt). Значения S Dt, полученные на разных этапах испытания, последовательно суммируют, а результаты сравнивают с уровнями, указанными в Таблице 1.

После первого этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 1,2 ºС (Таблица 1, колонка 3), а индивидуальное повышение температуры ни у одного из трех кроликов не превышает 0,5 ºС (колонка 4).

Если результат, полученный на первом этапе, превышает 1,2 ºС (колонка 5) или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры более чем на 0,5 ºС хотя бы у одного из трех кроликов (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.

После второго этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 2,8ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС отмечено не более, чем у одного из шести кроликов (колонка 4).

Если результат, полученный на втором этапе испытания, больше 2,8ºС, но меньше 4,3ºС (колонка 5), или более, чем у одного животного зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.

После третьего этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 4,5ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС отмечено не более, чем у двух из девяти кроликов (колонка 4).

Если результат, полученный на третьем этапе испытания, больше 4,5ºС, но меньше 6,0ºС (колонка 5), или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 ºС более, чем у двух животных (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.

После четвертого этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 6,6 ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 ºС отмечено не более, чем у трех из двенадцати кроликов (колонка 4).

Лекарственное средство признают пирогенным, если результат на втором или последующих этапах испытания выше, чем величины, указанные в колонке 7. Лекарственное средство признают пирогенным и в том случае, если в результате четырех этапов испытания зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС более, чем у трех кроликов из двенадцати.

Таблица 1 — Оценка результатов испытания

* При индивидуальном повышении температуры свыше 0,5 о С более, чем у трех кроликов из двенадцати, лекарственное средство признают пирогенным.

Источник