Регламент
Острая токсичность
Исследование острой токсичности проводится для определения влияния однократного введения дозы на определенные виды животных. Целями изучения острой токсичности являются определение безвредных, токсических, летальных доз вещества, его способности к кумуляции, а также причин гибели животных. Изучение острой токсичности для оригинальных препаратов рекомендуется проводить на двух видах животных. М инимальный размер группы 5–6 особей грызунов, при использовании собак или кроликов – 3-5 особей. При исследовании острой токсичности, исследуемый препарат вводят в различных дозах, наблюдая эффект в течение 14 дней. Смертность, вызванную исследуемым веществом, учитывают в течение экспериментального периода; изучаются морфологические, биохимические, патологические и гистологические изменения у мертвых животных. Определение LD50 включает большое число животных и высокую смертность. Из-за этих ограничений были разработаны модифицированные методики:
1) Процедура фиксированной дозы;
2) Метод острых токсических категорий;
3) Метод «вверх-вниз».
Процедура фиксированной дозы используется для оценки несмертельной токсичности, а не смертельной дозы. Исследуемое вещество вводят лабораторному животному в фиксированной дозе 5, 50, 500, и 2000 мг/кг. Метод острых токсических категорий является последовательной процедурой, в которой три животных одного и того же пола используются в каждом шаге. В способе скрининга острых токсических категорий могут быть использованы четыре предварительно определенные начальные дозы. Исследуемая доза должна быть выбрана на основе Согласованной на глобальном уровне системе классификаций.
Метод «вверх-вниз» также известен как конструкция лестницы. Этот метод токсикологического исследования наиболее рекомендован различными регулирующими органами, так как он уменьшает количество позвоночных животных в научных исследованиях. Метод скрининга «вверх-вниз» включает последовательное введение исследуемого препарата одному животному с интервалом 48 часов. Выбирают дозу меньше, чем LD50, вводят ее животному. Наблюдение проводят в течение 48 часов. Если животное выживает, исследование продолжают при более высокой дозе (в два раза от первоначальной дозы); если животное умирает, тестирование проводится при более низкой дозе с другим животным того же пола, что и исходное животное. Метод «вверх-вниз» ограничивает дозу вводимого вещества до 2000 мг/кг. Существуют различные методы исследования для доз 2000-5000 мг/кг.
В 1996 году Центром по оценке и исследованию лекарственных средств была предложена процедура тестирования острой токсичности. Разовая доза для фармацевтических веществ — это та, что не вызывает неблагоприятные последствия и не угрожает жизни животного. Эксперимент должен проводиться минимум на двух видах млекопитающих, в том числе на грызунах. Животные должны наблюдаться в течение 14 дней.
Источник
Острая токсичность лекарственное средство
Профилактика и лечение сосудистых заболеваний головного мозга является в настоящее время важной и актуальной задачей во всем мире. Инсульт – это серьезная проблема общественного здравоохранения, поскольку ежегодно около 15 миллионов человек во всем мире переносят инсульт [1; 2]. В нашей стране инсульт поражает более 450 000 человек в год, заболеваемость и смертность от острых нарушений мозгового кровообращения находится на 2-м месте среди других заболеваний. Для того чтобы избежать высокой смертности и инвалидности, необходимо раннее выявление и адекватное лечение инсульта, а также обязательное проведение реабилитационных мероприятий, которые препятствуют возникновению рецидива. Одним из компонентов реабилитации является медикаментозная терапия с использованием церебропротекторных, ноотропных и стресс-протекторных препаратов. Одним из перспективных направлений создания новых препаратов, обладающих церебропротекторным действием, является разработка инновационных соединений на основе пептидных биорегуляторов.
Новое потенциальное лекарственное средство (ЛС) на основе пептидэргического нейро- и стресс-протектора Nα-ацетил-D-лизил-лизил-аргинил-аргинил-амид является кандидатным препаратом для лечения нарушений мозгового кровообращения. Проведенные ранее доклинические исследования специфической фармакологической активности потенциального ЛС показали его высокую нейропротекторную эффективность in vivo [3]. Было показано, что данное потенциальное ЛС обладает антиишемической, антигипоксической, ноотропной и актопротекторной активностями [4]. Выявлено, что Nα-ацетил-D-лизил-лизил-аргинил-аргинил-амид, являющий активным фармакологическим ингредиентом потенциального ЛС, оказывает интегральное нейропротекторное действие, нормализует уровень провоспалительных цитокинов IL-1β и TNF-α, а также повышает содержание противовоспалительного интерлейкина-4 в головном мозге. Защитное действие пептида при церебральной ишемии характеризуется также нейротрофическим компонентом.
Целью данной работы являлись доклинические исследования острой и хронической токсичности потенциального ЛС «Лизаргам» на основе пептидэргического нейро- и стресс-протектора для лечения нарушений мозгового кровообращения.
Материалы и методы исследования
Исследуемое потенциальное ЛС «Лизаргам, спрей назальный дозированный 0,5% и 1,0%» (далее потенциальное ЛС «Лизаргам»), один флакон потенциального ЛС содержит активный фармацевтический ингредиент («D-лизаргам, ацетат») – 15 (0,5%) или 30 (1,0%) мг; физиологический раствор (ФР) — 3,0 мл; D-маннит — 30 мг. «D-лизаргам, ацетат» представляет собой синтетический тетрапептид последовательности Nα-ацетил-D-лизил-лизил-аргинил-аргинил-амид в виде ацетатной соли. Терапевтическая доза потенциального ЛС у человека составляет 20 мкг/кг. Эта доза рассчитывалась исходя из данных по изучению специфической активности потенциального ЛС на экспериментальных животных и коэффициента экстраполяции доз мышей и крыс на человека в соответствии с руководством Т.А. Гуськовой [9].
Доклинические исследования были выполнены на основе рекомендаций действующих методических документов 7. Животные поступили из питомника РАМН «Рапполово» Ленинградской области. Основные правила содержания и ухода соответствовали правилам, принятым Европейской конвенцией по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986 г.). Объем работ и перечень процедур был одобрен биоэтической комиссией института. Исследования проводили на 3 видах животных: белых беспородных крысах обоего пола (масса 180-200 грамм, возраст 9–10 недель), белых беспородных мышах обоего пола (19–21 г, 9–10 недель) и на кроликах породы шиншилла обоего пола (2-2,5 кг, 2-3 месяца).
Острая токсичность потенциального ЛС была изучена на мышах, крысах и кроликах. Период наблюдения после введения возрастающих доз составил 14 дней, для достижения высоких доз потенциальное ЛС вводили многократно в течение 10 часов. Эксперименты были проведены при интраназальном (и/н) и внутривенном (в/в) введении потенциального ЛС по одинаковым схемам. Мыши и крысы были случайным образом разделены на группы (по 5 самок и 5 самцов). В опытных группах мышам и крысам и/н вводили потенциальное ЛС в дозах 2, 20, 50 мг/кг; в/в — в дозах 20, 200, 500 мг/кг. И/н потенциальное ЛС вводилось животным при помощи автоматической одноканальной пипетки 10-100 мкл с соответствующим наконечником, введение осуществлялось в каждый носовой ход. В/в введение производилось в соответствии с требованиями [6], в максимальной дозе 500 мг/кг (50 мл/кг) каждой крысе вводили не более 2 мл за раз с интервалом 2 часа в течение 10 часов. Кролики были случайным образом разделены на группы (по 3 самки и по 3 самца в каждой). Кроликам в опытной группе потенциальное ЛС вводили и/н в дозе 25 мг/кг, в/в — в дозе 400 мг/кг. В контрольных группах животным по тем же схемам вводили ФР.
Во всех экспериментах проводили наблюдение за лабораторными животными в течение 14 суток после введения потенциального ЛС. Проводили клинический осмотр (ежедневно) до начала эксперимента (фоновые значения), а также выполняли взвешивание на 2, 7 и 14-й день после введения. У крыс и кроликов измеряли частоту сердечных сокращений (ЧСС) и частоту дыхательных движений (ЧДД). На 14-е сутки все животные были подвергнуты эвтаназии и патоморфологическому исследованию.
Оценка местнораздражающего действия была проведена на 3 кроликах-самцах. На слизистую оболочку правого глаза наносили 0,1 мл 1% потенциального ЛС, на слизистую оболочку левого глаза — 0,1 мл ФР. Наблюдение проводили в течение 24 часов с момента нанесения потенциального ЛС.
Испытания на пирогенность были проведены на кроликах-самцах и соответствовали требованиям ГФ XIII, ОФС 1.2.4.0005.15 [8]. Потенциальное ЛС вводили в ушную вену в объеме 0,2 мл/кг. Температуру измеряли 2 раза до начала исследования и каждые 30 минут в течение 3 часов после введения потенциального ЛС.
Хроническая токсичность потенциального ЛС была изучена на крысах, случайным образом разделенных на 4 группы (по 15 самок и 15 самцов в каждой). Потенциальное ЛС вводили и/н ежедневно, в течение 90 дней в 3 дозах: 1 мг/кг (50-кратная терапевтическая доза для человека, минимально возможная для экспериментального введения крысам), 3 и 5 мг/кг. Хроническая токсичность потенциального ЛС была также изучена на кроликах, самцах и самках, которые были случайным образом разделены на группы (по 3 самки и 3 самца в каждой). Потенциальное ЛС вводили и/н ежедневно, в течение 90 дней в 3 дозах: терапевтической дозе для кролика — 0,06 мг/кг (доза рассчитана путем умножения терапевтической дозы для человека на коэффициент пересчета по площади поверхности тела кролика 3,2); 3 мг/кг и максимальной — 5 мг/кг (более чем в 250 раз превышающей терапевтическую дозу для человека). Крысам и кроликам в контрольных группах по той же схеме вводили ФР.
Клинический осмотр животных выполняли ежедневно, в течение эксперимента регистрировали интегральные показатели состояния организма всех животных, а также патоморфологическое и патогистологическое исследования по окончании эксперимента. Физиологические исследования проводили до начала исследования, а также на 30-й и на 90-й день после начала введения потенциального ЛС.
Офтальмологическое исследование проводили на тех же сроках, оценивая состояние слизистых оболочек, наличие правильных роговичных рефлексов и измеряя величину зрачка и ширину глазной щели. Для лабораторных исследований собирали образцы крови и костный мозг.
Клинический анализ крови выполняли на автоматическом гематологическом анализаторе Abacus Junior vet5 (Diatron, Венгрия) и на мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Биохимические показатели в сыворотках крови (аланинаминотрансфераза (АлАТ), аспартатаминотранфераза (АсАТ), билирубин, глюкоза, креатинин, мочевина, общий белок, холестерин, щелочная фосфатаза) оценивали на полуавтоматическом биохимическом анализаторе Chem-7 (Erba, Чехия). Исследование мочи выполняли на экспресс-анализаторе мочи DocUReader (ANALYTICON Biotechnologies AG, Германия). Кроме того, проводили микроскопический анализ миелограммы на мазках смывов костного мозга и подсчет количества клеток костного мозга. Все тесты выполнялись по стандартным протоколам и инструкциям производителей наборов.
На основании результатов эксперимента по изучению хронической токсичности рассчитывали расчетный безопасный курс (РБК) и индекс безопасности (ИБ) потенциального ЛС при клиническом применении в соответствии с инструкцией Т.А. Гуськовой [9].
Патоморфологическое исследование после завершения экспериментов включало в себя некропсию, макроскопическое исследование и взвешивание внутренних органов. Также рассчитывали отношение массы органа к массе тела.
Патогистологическое исследование было выполнено с использованием образцов тканей, полученных от животных, которым вводили потенциальное ЛС в максимальной дозе, а также образцов тканей от животных контрольных групп. Материал фиксировали в 10%-ном формалине, обезвоживали, заключали в парафин и изготовляли гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином («Биовитрум», Россия). Препараты изучали в световом микроскопе DMLB (Leica Microsystems AG, Германия).
Статистический анализ проводили с помощью программы Microsoft Excel 2007 (Microsoft Corporation). Подсчитывали средние значения и ошибки среднего (М±m). Сравнение показателей между группами проводили с помощью непарного Т-критерия Стьюдента с неравными отклонениями, а также по U-критерию Манна-Уитни. Отличия считали достоверными при р 5) потенциальное ЛС «Лизаргам, спрей назальный» относится к III классу малотоксичных лекарственных препаратов.
- Изучение хронической токсичности на кроликах
Ежедневный клинический осмотр кроликов всех экспериментальных групп не выявил каких-либо значимых различий между группами, гибели подопытных животных не наблюдалось. Измерение массы тела показало, что данный параметр равномерно увеличивался на протяжении всего срока исследования как в контрольной, так и во всех опытных группах. Анализ показателей массы тела, потребления корма и воды, а также физиологических параметров (ЧДД, ЭКГ и ЧСС и АД) показал, что достоверные различия между всеми экспериментальными группами отсутствуют. Офтальмологическое исследование не выявило различий между экспериментальными группами, получавшими потенциальное ЛС или ФР.
Представленные в таблице 6 данные подтверждают, что ежедневное и/н введение потенциального ЛС в дозах 0,06-5 мг/кг в течение 30 и 90 дней не оказывало значительного влияния на количественный и качественный состав периферической крови кроликов. Также не было выявлено влияния потенциального ЛС на состояние красного костного мозга, биохимический состав крови, мочи и функциональную активность почек.
Оценка влияния ежедневного интраназального введения потенциального лекарственного средства «Лизаргам» на показатели периферической крови кроликов-самцов
Источник
Роспотребнадзор (стенд)
Роспотребнадзор (стенд)
Отравления лекарственным и препаратами — Полезная информация
Отравления лекарственным и препаратами
Отравления лекарственным и препаратами
Проведенные исследования говорят о том, что в наше с вами время существует большое количество людей, которые имеют давно сформировавшуюся привычку тянуться за медицинской панацеей при первых «сигналах» какого-либо недуга их организма: головные спазмы, диарея или просто бессонница. Несомненно, не пользоваться изобретениями медицины мы просто не в состоянии, но при этом делать это следует с умом, и только согласно предписаний лечащего доктора и, конечно, знать меру разумного в таблетках, ведь иначе можно просто стать жертвой тяжелой интоксикации.
Отравление лекарственными препаратами возможно из-за нарушения дозировки, употребления просроченных таблеток. В целом, отравление медикаментами может быть получено по ряду всевозможных причин:
- Нарушение дозировок
- Употребление таблеток, срок годности которых вышел
- Бесконтрольное лечение
- Совмещение несовместимых медикаментов
- Ошибочные лекарства
Такой тип интоксикации может повлечь за собой порой страшные и непоправимые результаты для человеческого тела и организма.
Никакие советы лучших друзей и соседки не смогут заменить консультации опытного врача. Только доктор в состоянии рекомендовать лечение с верной дозировкой, рассчитанной именно для вашего возраста и вашего организма.
Далее мы рассмотрим подробно последствия халатного отношения к своему здоровью и бесконтрольному употреблению таблеток. Также мы поговорим о том, как оказать важную первую помощь в данной ситуации.
Первые проявления
Симптомы интоксикации различаются между собой, и в итоге будут зависеть от вида лекарственного средства.
Можно сказать, что большая часть негативного воздействия этого вида отравления приходится именно на ЦНС человека. Отравившейся ощущает слабость, происходят приступы торможения реакции или же сильного психического возбуждения, в практике известны случаи, связанные с одновременной потерей сознания. Таковы наиболее распространенные симптомы. Если больному при этом типе отравления первая помощь будет оказана слишком поздно, то есть вероятность того, что все это может иметь и смертельные последствия для человека.
Общая информация по оказанию неотложной реанимации
Часто человек, находящийся рядом с пострадавшим во время оказания действий по реанимации, не владеет информацией, какой была именно передозировка. Бывают ситуации, когда начальные симптомы интоксикации организма можно заметить только лишь спустя один-два часа.
Какие же правила первой помощи при отравлении лекарственными средствами? Первое действие – незамедлительно вызвать врачей скорой на дом. Во время ожидания, ваши действия по спасению человека должны быть следующими. Рассмотрим всё по пунктам.
