1. Определение антимикробного действия лекарственного средства
Перед проведением контроля необходимо определить, обладает ли исследуемое лекарственное средство в условиях испытания на микробиологическую чистоту антимикробным действием, подавляющим рост отдельных видов бактерий и грибов, так как это может привести к неправильной оценке результатов анализа.
Для определения антимикробного действия используют тест-микроорганизмы, представленные в табл. 32.3.
Тест-микроорганизмы для определения
Bacillus subtilis ATCC 6633 Bacillus cereus ATCC 10702 Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella abony IHE 103/39 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (или Р. aeruginosa ГИСК 453) Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л.А.Тарасевича, Россия, г. Москва
Candida albicans NCTC 885-653 Candida albicans ATCC 10231
Всероссийский микологический Центр, Россия, г. Санкт-Петербург
Aspergillus niger ATCC 9642
Всероссийская коллекция микроорганизмов РАН, Россия, г. Москва
Кроме вышеперечисленных тест-штаммов можно использовать и другие микроорганизмы из различных коллекций, типичные по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам. Набор тест-микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в зависимости от способа применения или состава испытуемого лекарственного средства.
Нумерация абзацев дана в соответствии с официальным текстом документа.
1.2. Работа с тест-микроорганизмами
Ампулы с лиофилизированными культурами бактерий и грибов вскрывают в асептических условиях и вносят в них около 0,5 мл соответствующей жидкой питательной среды (например, среда N 8 — для бактерий, жидкая среда Сабуро — для C.albicans). Полученную взвесь тест-культур переносят в пробирки с теми же жидкими питательными средами и инкубируют при соответствующей температуре в течение 24 ч (бактерии) или 48 ч (C.albicans). После 2-3-х пассажей с бульона на бульон культуру микроорганизмов пересевают с помощью бактериологической петли на питательный агар в чашках Петри для получения изолированных колоний. Выросшую культуру каждого тест-штамма проверяют визуально на чистоту роста, изучают культурально-морфологические, тинкториальные и биохимические свойства. Типичные колонии пересевают в пробирки на скошенный агар того же состава и инкубируют, как было указано выше, считая полученную культуру исходной.
Культуру A.niger пересевают на агар Сабуро и инкубируют при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C в течение 5-7 сут. до появления конидий (экзогенных спор черного или темно-коричневого цвета).
Культуры бактерий пересевают каждый месяц, грибов — каждые 3 месяца, делая не более 5 пассажей с агара на агар, после чего используют новую ампулу или исходную культуру со среды хранения.
Тест-штаммы бактерий хранят при температуре (5 +/- 1) град. C в лиофилизированном состоянии или под слоем стерильного вазелинового масла на среде Романова.
Тест-культуру C.albicans хранят под слоем стерильного вазелинового масла на среде N 2 (агар Сабуро), в которой количество агара уменьшено до 0,5%. Тест-культуру A.niger хранят на среде N 2.
При пересеве культур со сред хранения предварительно удаляют слой масла над агаром, бактериологической петлей снимают верхний слой агара с выросшей культурой и переносят его в пробирки со средой N 8 для бактерий, жидкой средой Сабуро — для C.albicans. Посевы на среде N 8 инкубируют при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C в течение 18-24 ч, посевы на жидкой среде Сабуро — при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C в течение 48 ч для C.albicans. Для получения конидий культуру A.niger пересевают на среду N 2 и инкубируют при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C в течение 5-7 сут.
1.2.1. Приготовление спор B.subtilis
Если не удается получить гомогенную взвесь клеток B.subtilis, используют споры, получаемые следующим образом.
Культуру B.subtilis выращивают в пробирке на скошенном соево-казеиновом агаре или среде N 1 в течение 24 ч при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C. Смывают 5 мл стерильного 0,9% изотонического раствора натрия хлорида со стерильными стеклянными бусами. Взвесь бактерий переносят в матрац с 300 мл скошенного питательного агара, содержащего для ускорения спорообразования марганца сульфат в количестве 1 мг/л среды. Посевы инкубируют в течение 7 сут. при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C. Для подтверждения достаточного образования спор выросшую культуру микроскопируют. Если в мазках, окрашенных по Граму, имеется в поле зрения 80-90% спор, делают смыв культуры, внося в матрац 45 мл стерильного 0,9% изотонического раствора натрия хлорида. Нагревают полученную взвесь 30 мин. на водяной бане при температуре 65 град. C, центрифугируют при 4300 об./мин. в течение 15 мин., отмывают не менее 3 раз стерильным 0,9% изотоническим раствором натрия хлорида до полной прозрачности надосадочной жидкости. Снова нагревают на бане при температуре 65 град. C в течение 30 мин. Центрифугируют в течение 15 мин., ресуспендируют осадок (споры) в том же растворе, определяют количество спор в 1 мл чашечным агаровым методом. Хранят суспензию спор при (5 +/- 1) град. C в запаянных ампулах или пробирках не менее 8 недель.
1.3. Проведение испытания
Испытание на наличие антимикробного действия проводят одним из описанных ниже методов.
1.3.1. Разведение лекарственного средства
Готовят необходимые разведения лекарственного средства 1:10, 1:50, 1:100, 1:500 и 1:1000 методом последовательных разведений, используя фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном pH 7,0 (п. 4.2.).
1.3.2. Приготовление инокулята
24-часовые бульонные культуры бактерий на соево-казеиновом бульоне или
среде N 8 и 48-часовую культуру C.albicans на бульонной среде Сабуро
разводят стерильным раствором натрия хлорида 0,9% изотоническим 1:1000
(B.cereus, C.albicans) и 1:100000 (E.coli, S.abony, P.aeruginosa, S.aureus)
до концентрации около 10 КОЕ/мл. Взвесь спор B.subtilis также разводят до
концентрации 10 в 1 мл. Культуру A.niger смывают со скошенного агара
Сабуро или со среды N 2 фосфатным буферным раствором с 0,05% твина-80.
Определяют количество конидий в 1 мл смыва, используя камеру Горяева или
чашечный агаровый метод, и разводят до концентрации 10 КОЕ/мл.
1.3.3. Метод определения антимикробного действия в условиях испытания на микробиологическую чистоту
Каждое разведение препарата в количестве 1 мл вносят в 6 чашек Петри диаметром 90 мм, в две из которых добавляют по 0,2 мл взвеси спор B.subtilis, в две другие — по 0,2 мл взвеси культуры C.albicans, в 2 последние — 0,2 мл взвеси конидий A.niger. Чашки с бактериями заливают 10-15 мл расплавленного и охлажденного до (47,5 +/- 2,5) град. C питательного агара, чашки с культурами грибов — тем же количеством среды Сабуро. По 1,0 мл каждого разведения препарата вносят в пробирки с 10 мл жидких сред N 3 и N 8 (или аналогичных), куда затем добавляют по 1 мл взвеси Е.coli, S.abony, P.aeruginosa, S.aureus соответственно средам, каждый микроорганизм отдельно. В контрольные чашки и пробирки вместо разведений препарата вносят такое же количество растворителя. Опыт ставят в двойной повторности. Посевы на средах N 1, 3, 8 инкубируют при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C в течение 48 ч (среды N 3, 8) и 5 сут. (среда N 1). Посевы на среде N 2 инкубируют при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C в течение 5 сут.
После окончания сроков инкубации отмечают появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках и пробирках без препарата и наличие или отсутствие роста тест-штаммов на средах с различными разведениями препарата. В случае помутнения или изменения окраски среды, затрудняющих учет результатов, делают пересевы на агаризованные среды. При росте типичных колоний E.coli, S.abony, P.aeruginosa, S.aureus отмечают отсутствие антимикробного действия исследуемого препарата.
1.3.4. Метод репликаций
Для водонерастворимых (суспензии, эмульсии и др.) или окрашенных соединений предпочтительно использовать метод репликаций.
В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каждого разведения исследуемого препарата. В контрольные чашки вносят по 1 мл разбавителя, используемого для получения разведений. В чашки Петри как в эксперименте, так и в контроле, добавляют по 10-15 мл расплавленного и охлажденного до (45 +/- 2) град. C соево-казеинового агара или среды N 1, в другие — такое же количество среды Сабуро и тщательно перемешивают. Опыт ставят в двойной повторности.
После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденсата с поверхности среды, на которую затем бактериологической петлей, пипеткой или репликатором наносят инокулят (п. 1.3.2.) каждого тест-штамма бактерий и грибов в виде бляшек на среды N 1 и N 2 (или аналогичные) соответственно. Чашки с соево-казиновым агаром или средой N 1 инкубируют при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C в течение 48 ч. Чашки со средой Сабуро инкубируют при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C в течение не более 5 сут.
1.4. Учет и интерпретация результатов
Наличие такого же роста тест-микроорганизмов, как в контроле, обозначают знаком «+», отсутствие роста — знаком «-«, слабый, замедленный или угнетенный рост — знаком «+/-«. Если по сравнению с контролем на средах с препаратом наблюдают заметное уменьшение количества колоний на чашках (более 70%) или отсутствие роста тест-микроорганизмов, делают заключение о наличии антимикробного действия.
Первое из последовательных разведений препарата, в котором отсутствует антимикробное действие, используют для посева на соответствующую питательную среду.
1.5. Способы устранения антимикробного действия лекарственных средств
Для устранения антимикробного действия препаратов применяют следующие методы:
— Используют соответствующие специфические инактиваторы (например, парааминобензойную кислоту (ПАБК) и бета-лактамазу), нейтрализующие антимикробное действие препарата, но не угнетающие рост микроорганизмов, контаминирующих НЛС.
— Используют неспецифические инактиваторы, добавляя в буферный раствор и/или в питательные среды: твин-20, твин-80, соевый или яичный лецитин и др. Для разведения лекарственного средства перед испытанием на микробиологическую чистоту можно использовать стерильную нейтрализующую жидкость.
Если разведение в вышеприведенном растворе не инактивирует антимикробные свойства лекарственного средства, увеличивают концентрацию твина-80 или лецитина. Альтернативно допускается добавление в буферный раствор других веществ, инактивирующих антимикробное действие лекарственных средств.
— Увеличивают разведение препарата, взяв больший объем растворителя в пределах норм допустимой микробной загрязненности.
— Применяют метод мембранной фильтрации с последующей промывкой фильтров, если позволяет природа исследуемого лекарственного средства, т.е. препарат растворим в воде или в изопропилмиристате (ИПМ).
1.5.1. Инактивация некоторых антибиотиков
Для инактивации пенициллинов и цефалоспоринов, независимо от их лекарственной формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспендирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды перед их употреблением, асептически вносят стерильный раствор бета-лактамазы в количестве, указанном в частной фармакопейной статье.
1.5.2. Инактивация сульфаниламидных препаратов
Для инактивации сульфаниламидных препаратов, независимо от их лекарственной формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспен-дирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды до стерилизации вносят парааминобензойную кислоту (ПАБК) из расчета 0,05 г/л среды, если антимикробное действие не удается устранить путем разведения.
1.5.3. Инактивация консервантов, входящих в состав лекарственных средств
Для инактивации консервантов, входящих в состав ряда лекарственных препаратов, в буферный раствор, в котором эмульгируют образец, а также в питательные среды до стерилизации вносят следующие неспецифические инактиваторы: 3% твина-80 или 0,3% лецитина (яичного или соевого) от объема среды. В случае, если в препарате имеется более 2 консервантов различной химической структуры, в среду вносят 0,3% лецитина; 3% твина-80; 0,1% L-гистидина и 0,5% натрия тиосульфата одновременно.
Инактиваторы антимикробного действия консервантов лекарственных средств указаны в табл. 32.4.
Инактиваторы антимикробного действия консервантов
│ Химические │ Инактиватор │ Концентрация │ Примечание │
│Фенолы │- Натрия лаурилсульфат│4,0 г/л │Добавляют в │
│ │- Твин-80 и лецитин │30,0 г/л и 3,0 г/л│стерильный │
│ │- Яичный желток │5,0-50,0 мл/л │буферный раствор │
│ │ │ │с натрия хлоридом│
│ │ │ │и пептоном pH 7,0│
│Ртутно- │Натрия тиогликолят │0,5-5,0 г/л │ │
│Галогены │Натрия тиосульфат │5,0 г/л │ — │
│Четвертичные │Яичный желток │5,0-50,0 мл/л │Добавляют в │
│аммония │ │ │буферный раствор │
│ │ │ │с натрия хлоридом│
│ │ │ │и пептоном pH 7,0│
В качестве растворителя для устранения антимикробного действия используют также нейтрализующую жидкость лабораторного или промышленного изготовления следующего состава:
Лецитина (яичного или соевого) — 3,0 г
Гистидина гидрохлорида — 1,0 г
Пептона (мясного или казеинового) — 1,0 г
Натрия хлорида — 4,3 г
Калия фосфата однозамещенного — 3,6 г
Натрия фосфата двузамещенного — 7,2 г
Воды очищенной — 1000 мл
Стерилизуют в автоклаве, валидируя
pH после стерилизации — 7,6 +/- 0,2
Если в связи с природой лекарственного средства, нерастворимого в воде или изопропилмиристате, нельзя использовать метод мембранной фильтрации, а все вышеперечисленные методы устранения его антимикробного действия в отношении конкретного тест-микроорганизма неэффективны, этот вид испытания не проводят.
Источник
Антимикробные средства. Классификация антимикробных препаратов
По спектру активности антимикробные препараты делятся на: антибактериальные, антигрибковые и антипротозойные. Кроме того, все антимикробные средства делят на препараты узкого и широкого спектра действия.
К препаратам узкого спектра действия преимущественно на грамположительные микроорганизмы относятся, например, природные пенициллины, макролиды, линкомицин, фузидин, оксациллин, ванкомицин, цефалоспорины I поколения. К препаратам узкого спектра действия преимущественно на грамотрицательные палочки относятся полимиксины и монобактамы. К препаратам широкого спектра действия относятся тетрациклины, левомицетин, аминогликозиды, большинство полусинтетических пенициллинов, цефалоспорины начиная со 2 поколения, карбопенемы, фторхинолоны. Узкий спектр имеют антигрибковые препараты нистатин и леворин (только против кандиды), а широкий – клотримазол, миконазол, амфотерицин В.
По типу взаимодействия с микробной клеткой антимикробные препараты делятся на:
· бактерицидные – необратимо нарушают функции микробной клетки либо ее целостность, вызывая немедленную гибель микроорганизма, применяются при тяжелых инфекциях и у ослабленных больных,
· бактериостатические – обратимо блокируют репликацию или деление клетки, применяются при нетяжелых инфекциях у неослабленных больных.
По кислотоустойчивости антимикробные препараты классифицируются на:
· кислотоустойчивые – могут применяться перорально, например, феноксиметилпенициллин,
· кислотонеустойчивые – предназначены только для парентерального применения, например, бензилпенициллин.
В настоящее время используются следующие основные группы антимикробных препаратов для системного применения.
¨ Лактамные антибиотики
Лактамные антибиотики (табл. 9.2) из всех антимикробных препаратов наименее токсичны, так как, нарушая синтез клеточной стенки бактерий, не имеют мишени в организме человека. Их применение при наличии чувствительности к ним возбудителей является предпочтительным. Наиболее широкий спектр действия среди лактамных антибиотиков имеют карбапенемы, они используются как препараты резерва – только при инфекциях, резистентных к пенициллинам и цефалоспоринам, а также при госпитальных и полимикробных инфекциях.
¨ Антибиотики других групп
Антибиотики других групп (табл. 9.3) имеют различные механизмы действия. Бактериостатические препараты нарушают этапы синтеза белка на рибосомах, бактерицидные – нарушают либо целостность цитоплазматической мембраны, либо процесс синтеза ДНК и РНК. В любом случае они имеют мишень в организме человека, поэтому по сравнению с лактамными препаратами более токсичны, и должны использоваться только при невозможности применения последних.
¨ Синтетические антибактериальные препараты
Синтетические антибактериальные препараты (табл. 9.4) также имеют различные механизмы действия: ингибирование ДНК-гиразы, нарушение включения ПАБК в ДГФК и т.д. Также рекомендуются к применению при невозможности использования лактамных антибиотиков.
¨ Побочные эффекты антимикробных препаратов,
их профилактика и лечение
Антимикробные препараты обладают целым рядом разнообразных побочных эффектов, некоторые из которых могут привести к тяжелым осложнениям и даже к летальному исходу.
Аллергические реакции
Аллергические реакции могут иметь место при применении любого антимикробного препарата. Могут развиться аллергический дерматит, бронхоспазм, ринит, артрит, отек Квинке, анафилактический шок, васкулит, нефрит, волчаночноподобный синдром. Чаще всего они наблюдаются при применении пенициллинов и сульфаниламидов. У некоторых пациентов развивается перекрестная аллергия на пенициллины и цефалоспорины. Зачастую отмечаются аллергии на ванкомицин и сульфаниламиды. Очень редко дают аллергические реакции аминогликозиды и левомицетин.
Профилактике способствует тщательный сбор аллергологического анамнеза. Если пациент не может указать, на какие именно антибактериальные препараты в у него наблюдались аллергические реакции, перед введением антибиотиков необходимо выполнение проб. Развитие аллергии независимо от тяжести реакции требует немедленной отмены вызвавшего ее препарата. В последующем введение даже сходных по химической структуре антибиотиков (например, цефалоспоринов при аллергии на пенициллин) допускается только в случаях крайней необходимости. Лечение инфекции должно быть продолжено препаратами других групп. При тяжелых аллергических реакциях требуется внутривенное введение преднизолона и симпатомиметиков, инфузионная терапия. В нетяжелых случаях назначаются антигистаминные препараты.
Раздражающее действие на путях введения
При пероральном применении раздражающее действие может выражаться в диспепсических явлениях, при внутривенном введении – в развитии флебитов. Тромбофлебиты чаще всего вызывают цефалоспорины и гликопептиды.
Суперинфекция, в том числе дисбактериоз
Вероятность дисбактериоза зависит от широты спектра действия препарата. Наиболее часто возникающий кандидомикоз развивается при применении препаратов узкого спектра через неделю, при применении препаратов широкого спектра – уже от одной таблетки. Однако цефалоспорины относительно редко дают грибковую суперинфекцию. На 1 месте по частоте и тяжести вызываемого дисбактериоза находится линкомицин. Нарушения флоры при его применении могут принять характер псевдомембранозного колита – тяжелого заболевания кишечника, вызываемого клостридиями, сопровождающегося диареей, дегидратацией, электролитными нарушениями, и в отдельных случаях осложняющегося перфорацией толстой кишки. Гликопептиды тоже могут вызвать псевдомембранозный колит. Часто вызывают дисбактериоз тетрациклины, фторхинолоны, левомицетин.
Дисбактериоз требует отмены применявшегося препарата и длительного лечения эубиотиками после предварительной антимикробной терапии, которая проводится по результатам чувствительности микроорганизма, вызвавшего воспалительный процесс в кишечнике. Применяемые для лечения дисбактериоза антибиотики не должны оказывать влияния на нормальную кишечную аутофлору – бифидо- и лактобактерии. Однако при лечении псевдомембранозного колита используется метронидазол или, как альтернатива, ванкомицин. Необходима также коррекция водно-электролитных нарушений.
Нарушение толерантности к алкоголю — свойственно всем лактамным антибиотикам, метронидазолу, левомицетину. Проявляется появлением при одновременном употреблении алкоголя тошноты, рвоты, головокружения, тремора, потливости и падения артериального давления. Пациенты должны быть предупреждены о недопустимости приема алкоголя на весь период лечения антимикробным препаратом.
Органоспецифичные побочные эффекты для различных групп препаратов:
· Поражение системы крови и кроветворения – присущи левомицетину, реже линкосомидам, цефалоспоринам 1 поколения, сульфаниламидам, производным нитрофурана, фторхинолонам, гликопептидам. Проявляется апластической анемией, лейкопенией, тромбицитопенией. Необходима отмена препарата, в тяжелых случаях заместительная терапия. Геморрагический синдром может развиться при применении цефалоспоринов 2-3 поколения, нарушающих всасывание витамина К в кишечнике, антисинегнойных пенициллинов, нарушающих функции тромбоцитов, метронидазола, вытесняющего кумариновые антикоагулянты из связей с альбумином. Для лечения и профилактики используются препараты витамина К.
· Поражение печени – присущи тетрациклинам, которые блокируют ферментную систему гепатоцитов, а также оксациллину, азтреонаму, линкозаминам и сульфаниламидам. Холестаз и холестатический гепатит могут вызвать макролиды, цефтриаксон. Клиническими проявлениями служит повышение печеночных ферментов и билирубина в сыворотке крови. При необходимости применения гепатотоксических антимикробных средств более недели необходим лабораторный контроль перечисленных показателей. В случае повышения АСТ, АЛТ, билирубина, щелочной фосфатазы или глутамилтранспептидазы лечение должно быть продолжено препаратами других групп.
· Поражение костей и зубов характерны для тетрациклинов, растущих хрящей – для фторхинолонов.
· Поражение почек присуще аминогликозидам и полимиксинам, которые нарушают функции канальцев, сульфаниламидам, вызывающим кристаллурию, цефалоспоринам поколения, вызывающим альбуминурию, и ванкомицину. Предрасполагающими факторами являются старческий возраст, заболевания почек, гиповолемия и гипотензия. Поэтому при лечении данными препаратами необходима предварительная коррекция гиповолемии, контроль диуреза, подбор доз с учетом функции почек и массы ткла, Курс лечения должен быть коротким.
· Миокардит – побочный эффект левомицетина.
· Диспепсия, не являющаяся следствием дисбактериоза, характерна при применении макролидов, которые обладают прокинетическими свойствами.
· Различные поражения ЦНС развиваются от многих антимикробных препаратов. Наблюдаются:
— психозы при лечении левомицетином,
— парезы и периферические параличи при применении аминогликозидов и полимиксинов за счет их курареподобного действия (поэтому их нельзя применять одновременно с миорелаксантами),
— головная боль и центральная рвота при использовании сульфаниламидов и нитрофуранов,
— судороги и галлюцинации при использовании аминопенициллинов и цефалоспоринов в высоких дозах, являющиеся результатом антагонизма этих препаратов с ГАМК,
— судороги при применении имипенема,
— возбуждение при использовании фторхинолонов,
— менингизм при лечении тетрациклинами из-за увеличения ими продукции ликвора,
— нарушения зрения при лечении азтреонамом и левомицетином,
— периферическая нейропатия при применении изониазида, метронидазола, левомицетина.
· Поражение слуха и вестибулярные расстройства – побочный эффект аминогликозидов, более свойственный 1 поколению. Так как данный эффект связан с накоплением препаратов, длительность их применения не должна превышать 7 дней. Дополнительными факторами риска являются старческий возраст, почечная недостаточность и одновременное применение петлевых диуретиков. Обратимые изменения слуха вызывает ванкомицин. При появлении жалоб на снижение слуха, головокружение, тошноту, неустойчивость при ходьбе необходима замена антибиотика на препараты других групп.
· Поражения кожи в виде дерматита характерны для левомицетина. Тетрациклины и фторхинолоны вызывают фотосенсибилизацию. При лечении этими препаратами не назначаются физиотерапевтические процедуры, и следует избегать нахождения на солнце.
· Гипофункцию щитовидной железы вызывают сульфаниламиды.
· Тератогенность присуща тетрациклинам, фторхинолонам, сульфаниламидам.
· Возможен паралич дыхательной мускулатуры при быстром внутривенном введении линкомицина и кардиодепрессия при быстром внутривенном введении тетрациклинов.
· Электролитные нарушения вызывают антисинегнойные пенициллины. Особо опасно развитие гипокалиемии при наличии заболеваний сердечно-сосудистой системы. При назначении данных препаратов необходим контроль ЭКГ и электролитов крови. При лечении используют инфузионно-корригирующую терапию и диуретики.
Микробиологическая диагностика
Эффективность микробиологической диагностики, абсолютно необходимой для рационального подбора антимикробной терапии, зависит от соблюдения правил забора, транспортировки и хранения исследуемого материала. Правила забора биологического материала включают:
— взятие материала из области, максимально приближенной к очагу инфекции,
— предотвращение контаминации другой микрофлорой.
Транспортировка материала должна с одной стороны обеспечить жизнеспособность бактерий, а с другой — предотвратить их размножение. Желательно, чтобы материал хранился до начала исследования при комнатной температуре и не более 2 часов. В настоящее время для забора и транспортировки материала используются специальные плотно закрывающиеся стерильные контейнеры и транспортные среды.
В не меньшей степени эффективность микробиологической диагностики зависит от грамотной интерпретации результатов. Считается, что выделение патогенных микроорганизмов даже в малых количествах всегда позволяет отнести их к истинным возбудителям заболевания. Условно патогенный микроорганизм считают возбудителем, если он выделяется из стерильных в норме сред организма или в большом количестве из сред, не характерных для его обитания. В противном случае он является представителем нормальной аутофлоры либо контаминирует исследуемый материал в процессе забора или исследования. Выделение малопатогенных бактерий из нехарактерных для их обитания областей в умеренных количествах свидетельствует о транслокации микроорганизмов, однако не позволяет отнести их к истинным возбудителям заболевания.
Гораздо сложнее бывает интерпретировать результаты микробиологического исследования при высевании нескольких видов микроорганизмов. В таких случаях ориентируются на количественное соотношение потенциальных возбудителей. Чаще значимыми в этиологии данного заболевания бывают 1-2 из них. Следует иметь в виду, что вероятность равной этиологической значимости более чем 3 различных видов микроорганизмов незначительна.
В основе лабораторных тестов на выработку грамотрицательными микроорганизмами БЛРС лежит чувствительность БЛРС к ингибиторам бета-лактамаз, таким как клавулановая кислота, сульбактам и тазобактам. При этом, если микроорганизм семейства энтеробактерий оказывается резистентен к цефалоспоринам 3 поколения, а при добавлении к этим препаратам ингибиторов бета-лактамаз демонстрирует чувствительность, то данный штамм идентифицируется как БЛРС-продуцирующий.
Антибиотикотерапия должна быть направлена только на истинный возбудитель инфекции! Однако в большинстве стационаров микробиологические лаборатории не могут установить этиологию инфекции и чувствительность возбудителей к антимикробным препаратам в день поступления больного, поэтому неизбежным является первичное эмпирическое назначение антибиотиков. При этом учитываются особенности этиологии инфекций различных локализаций, характерные для данного лечебного учреждения. В связи с чем необходимы регулярные микробиологические исследования структуры инфекционных заболеваний и чувствительности их возбудителей к антибактериальным препаратам в каждом стационаре. Анализ результатов такого микробиологического мониторинга необходимо проводить ежемесячно.
Источник
