Методы микробиологического контроля лекарственных средств

федеральное бюджетное учреждение здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Марий Эл»

Проблема микробной загрязненности лекарственных препаратов одна из наиболее важных в медицинской практике. Инфицирование лекарств может происходить на всех этапах их приготовления, в процессе получения из лекарственного сырья, через используемую воду, недостаточно стерильную лекарственную посуду, воздух производственных помещений, руки персонала, нарушения санитарных условий хранения, особенно температурно-влажностного режима. Поэтому необходим тщательный микробиологический контроль на всех этапах получения и хранения препаратов.

Инфицированные препараты могут вызвать заболевания человека, тяжелые пирогенные и аллергические реакции. Микроорганизмы значительно изменяют и свойства самого препарата. Может происходить накопление микробных токсинов и ферментов, расщепление химических структур, появление новых ядовитых свойств.

По технологии получения и санитарным нормам лекарственные препараты могут быть разделены на 3 группы:

1). Стерильные (для парентерального введения, капли в глаза, нос, мази для применения на рану, ожоговую и обмороженную поверхность и все препараты для новорожденных детей).

2). Нестерильные препараты без антимикробного действия.

3). Препараты обладающие антимикробным действием.

Для соблюдения санитарного режима изготовления лекарственных препаратов проводят санитарно-микробиологический контроль объектов окружающей среды предприятия и каждой серии выпускаемой лекарственной формы.

Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки и иное, в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно-технической документации, должны быть стерильными. Контроль стерильности лекарственных средств проводят путем посева на тиогликолевую среду для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов.При посеве на среду Сабуро выявляют грибы, главным образом рода Candida . Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определяют путем мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, обычно содержат микроорганизмы, поэтому их испытывают на микробиологическую чистоту. Для этого проводят количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов в 1г или 1 мл препарата, а также выявляют микроорганизмы, которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах. В 1г или 1мл лекарственного сырья для приема внутрь должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов. В случаях местного применения количество микроорганизмов не должно превышать 100 микробных клеток на 1г или 1мл препарата. В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тысяч микробных клеток на таблетку.

Источник

Приложение 1. Производство стерильных лекарственных средств

Производство стерильных лекарственных средств

К производству стерильных лекарственных средств предъявляются особые требования, которые направлены на сведение к минимуму риска загрязнения микроорганизмами, частицами и пирогенами. Выполнение этих требований во многом зависит от опыта персонала, его подготовки и отношения к работе. Особенно высокие требования предъявляются к обеспечению качества, подготовке и выполнению технологических процессов, их тщательной отработке и аттестации (испытаниям). Контроль завершающей стадии производства или контроль готовой продукции не может рассматриваться как единственное средство обеспечения стерильности или других показателей качества продукции.

Примечание — Настоящий стандарт не устанавливает методы определения чистоты воздуха, поверхностей и пр. по микроорганизмам и частицам. Эти требования приведены в других нормативных документах (стандартах ЕН, ИСО, ГОСТ Р ИСО и др.).

1 Производство стерильной продукции должно быть организовано в чистых помещениях (зонах) с воздушными шлюзами для обеспечения доступа персонала и/или перемещения оборудования и материалов. В чистых помещениях (зонах) должен поддерживаться уровень чистоты по соответствующему стандарту, а воздух должен подаваться через фильтры необходимой эффективности.

2 Подготовка исходных материалов, приготовление продукции и наполнение должны выполняться в отдельных зонах (помещениях) в пределах чистой зоны (помещения).

Процессы производства стерильных лекарственных средств подразделяются на две категории:

— предусматривающие финишную стерилизацию (т.е. стерилизацию в герметичной первичной упаковке);

— проводимые в асептических условиях на одном или всех этапах производства.

3 Чистые помещения (зоны) для производства стерильной продукции классифицируются в соответствии с требованиями к окружающей среде. Каждая производственная операция требует определенного уровня чистоты окружающей среды в эксплуатируемом помещении (зоне) с целью сведения к минимуму риска загрязнения продукта или материалов частицами или микроорганизмами.

Для обеспечения соответствия чистых помещений (чистых зон) требованиям, предъявляемым к эксплуатируемому состоянию, проектом должно предусматриваться соответствие заданным классам чистоты воздуха в оснащенном состоянии.

Оснащенное состояние — состояние, в котором чистое помещение построено и функционирует, технологическое оборудование полностью укомплектовано, но персонал отсутствует.

Эксплуатируемое состояние — состояние чистого помещения, в котором технологическое оборудование функционирует в требуемом режиме с заданным числом работающего персонала.

Требования к оснащенному и эксплуатируемому состоянию должны быть установлены для каждого чистого помещения или комплекса чистых помещений.

Чистые зоны при производстве стерильных лекарственных средств подразделяются на четыре типа:

А — локальная зона для проведения операций, представляющих высокий риск для качества продукции, например, зоны наполнения, укупорки; зоны, где ампулы и флаконы находятся в открытом состоянии и выполняются соединения частей оборудования в асептических условиях. Как правило, в таких зонах используют однонаправленный (ламинарный) поток воздуха, обеспечивающий в незамкнутой чистой зоне однородную скорость 0,36 — 0,54 м/с (рекомендуемое значение). Поддерживание однонаправленности воздушного потока должно быть подтверждено при аттестации (испытаниях). В закрытых изолирующих устройствах и перчаточных боксах допускается использовать однонаправленный поток воздуха с меньшей скоростью;

В — зона, непосредственно окружающая зону А и предназначенная для асептического приготовления и наполнения;

С и D — чистые зоны для выполнения менее ответственных стадий производства стерильной продукции.

Классификация чистых помещений и чистых зон

4 Чистые помещения и чистые зоны следует классифицировать по ГОСТ ИСО 14644-1.

Порядок подтверждения класса чистоты при аттестации (испытании) и порядок текущего контроля различны. Максимально допустимая концентрация аэрозольных частиц для каждой зоны приведена в таблице.

Максимально допустимое число частиц в 1 м3 воздуха, при размере частиц, равном или большем

Источник

Методы микробиологического контроля лекарственных средств

Требования, предъявляемые к микробиологической чистоте лекарственных средств, субстанций и вспомогательных материалов. Испытание на Enterobacteriacea, количественное определение энтеробактерий. Определение антимикробного действия лекарственных средств.

Рубрика	Медицина
Вид	методичка
Язык	русский
Дата добавления	07.06.2009
Размер файла	15,0 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

ФАРМАКОПЕЙНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

к статье Госфармакопеи XI издания

«Методы микробиологического контроля лекарственных средств»

(ГФХ1, вып. 2, с. 187)

Срок введения Изменения с 01.01.2002 г.

РАЗДЕЛ 1. «Требования, предъявляемые к микробиологической чистоте лекарственных средств, субстанций и вспомогательных материалов»

РАЗДЕЛ 2. «Испытание на Enterobacteriacea»

РАЗДЕЛ 3. «Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных средств»

РАЗДЕЛ 1. Требования, предъявляемые к микробиологической чистоте лекарственных средств, субстанций и вспомогательных материалов

Таблица 1. Микробиологическая чистота лекарственных средств

Рекомендуемые нормы для Госфармакопеи XII издания

Для парентерального введения

Глазные лекарственные средства

Для нанесения на открытые раны и ожоги

Другие лекарственные средства, к которым предъявляется требование «стерильность»

Для применения местно, трансдермально

(суммарно) — не более 102 интравагинально

Для введения в полости

Отсутствие бактерий уха, носа

Для введения в дыхательные пути (за исключением тех лекарственных средств, которые должны быть стерильными)

Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) — не более 102 в 1 г или в 1 мл

Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriace в 1 г или в 1 мл

Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл

Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл

Для приема внутрь или введения ректально

А. Лекарственные средства из субстанций синтетического происхождения

Б. Лекарственные средства из субстанций природного происхождения (растительного, животного или минерального), за исключением лекарственных средств, включенных в Категорию 4

В. Детские лекарственные средства

Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1 г или в 1 мл

Общее число грибов — не более 102 в 1 г или 1 мл

Отсутствие Escherichia coli в 1 г или 1 мл

Общее число аэробных бактерий не более 104 в 1 г или в 1 мл

Общее число грибов — не более 102 в 1 г или в 1 мл

Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл

Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1 мл

Отсутствие Staphylococcus aureus в 1г или в 1 мл

Энтеробактерий — не более 102 в 1 г или в 1мл

Общее число аэробных бактерий не более 500 в 1г или в 1мл

Общее число грибов — не более 50 в 1г или в 1мл

Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1г или в 1мл

Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1мл

Отсутствие Staphylococcus aureus в 1г или в 1мл

Лекарственные средства, состоящие из одного вида сырья (фасованная продукция) или нескольких (сборы), а также растительное сырье «ангро»

А. Лекарственные растительные средства или лекарственное сырье «ангро», применяемые в виде настоев и отваров, приготовленные с использованием термической обработки

Б. Лекарственные растительные средства или растительное сырье «ангро», применяемые без термической обработки

Общее число аэробных бактерий не более 107 в 1г или в 1мл

Общее число грибов — не более 105 в 1г или в 1мл

Escherichia coli — не более 102 в 1г или в 1мл

Общее число аэробных бактерий не более 105 в 1г или в 1мл

Общее число грибов — не более 104 в 1г или в 1мл

Отсутствие Escherichia coli — в 1г или в 1мл

Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

Энтеробактерий — не более 103 в 1г или в 1мл

Таблица 2. Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных материалов для производства лекарственных средств

Рекомендуемые нормы для Госфармакопеи XII издания

Субстанции для производства:

Стерильных лекарственных средств

Нестерильных лекарственных средств, относящихся к Категории 2

Нестерилъных лекарственных средств, относящихся к Категории 3В

Субстанции синтетического происхождения для производства нестерильных лекарственных средств

Субстанции природного происхождения (растительного, животного или минерального)

Вспомогательные материалы (мука пшеничная, крахмал, тальк и т.д.)

Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) не более 102 в 1г или в 1мл

Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1мл

Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1мл

Отсутствие Staphylococ-cus аuerus 1 г или в 1мл

Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1г или в 1 мл

Общее число грибов — не более 102в 1г или в 1мл

Отсутствие Escherichia coli — в 1г или в 1мл

Общее число аэробных бактерий не более 104 в 1г или в 1мл

Общее число грибов — не более 102 в 1 г или в 1мл — — Отсутствие Escherichia coli — в 1г или в 1мл

Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1мл

Отсутствие Staphylococ-cus aureus в 1г или в 1мл

Энтеробактерий — не более 102 в 1г или в 1мл

Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1г или в 1мл

Общее число грибов — не более 102 в 1г или в 1мл

Отсутствие Escherichia coli — в 1г или в 1мл

Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1мл

Отсутствие Staphylococ-cus aureus в 1г или в 1мл

Примечания к таблицам 1 и 2:

— В фармакопейных статьях предприятия (ФСП) могут быть указаны в виде исключения и другие нормативы

— При обнаружении других патогенных бактерий, кроме указанных выше, считают, что качество лекарственных средств, субстанций и вспомогательного материала не соответствует требованиям по показателю «Микробиологическая чистота»

РАЗДЕЛ 2. ИСПЫТАНИЕ НА Enterobacteriaceae

Дополнение к разделу: «Выявление и идентификация семейства Enterobacteriaceae» общей ФС «Испытание на микробиологическую чистоту» ГФХ1 издания, выпуск 2,стр.197-198.

2.1 КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ЗА ИСКЛЮЧЕНИЕМ Escherichia coli и Salmonella

Юг или 10 мл испытуемого образца помещают в 100 мл среды № 11, гомогенизируют и инкубируют при температуре 32.5 + 2.5°С в течение, как правило, двух часов, но не более пяти. В случае, если лекарственное средство — суппозитории или растворы в маслах, в среду № 11 добавляют стерильный Твин-80 в количестве не более 5% и стеклянные бусы для эмульгирования.

Гомогенат перемешивают и готовят разведения 1:10 и 1:100, используя для этого среду № 3. В три пробирки с 10 мл среды № 3 вносят 1 мл гомогената в первую, 1 мл разведения 1:10 во вторую и 1 мл разведения 1:100 в третью, то есть соответственно 0.1 г, 0.01 г, 0.00 1 г образца. Посевы инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течение 24-48 ч. При наличии роста делают пересев петлей на плотную среду № 4 (агар Эндо) и инкубируют чашки Петри при той же температуре в течение 18-24 ч. В случае появления характерных для Enterobacteriaceae колоний грамотрицательных палочек определяют количество энтеробактерий в 1 г или в 1 мл образца по Таблице 3.

Таблица 3. Количественное определение энтеробактерий

Количество испытуемого образца

Вероятностное количество бактерий в 1 г (мл)

0,1 г (мл) 1 мл гомогената

0,01 г (мл) 1 мл гомогената в разведении 1:10

0,001 г (мл) 1 мл гомогената в разведении 1:100

+ — наличие роста бактерий

— — отсутствие роста бактерий

Количество клеток E.coli в 1г (мл) исследуемого лекарственного средства определяют, пользуясь также данной таблицей.

2.2 ИСПЫТАНИЕ НА НАЛИЧИЕ

Escherichia coli и Salmonella

Юг (мл) образца лекарственного средства вносят в 100 мл питательной среды №11 (лактозный бульон). В случае, если лекарственное средство — жидкость, количество среды уменьшают до 90 мл. Инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течение 2-5 ч. 10 мл среды №11 переносят в 100 мл среды

№3, перемешивают и инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течение 18-24 ч. При отсутствии роста на среде №3 (среда прозрачная, цвет не изменился) считают, что в лекарственном средстве не содержатся бактерии ceM.Enterobacteriaceae. При наличии роста испытания продолжают.

2.2.1 ИСПЫТАНИЕ НА E.coli

Со среды №3 делают пересев петлей на среду №4 (агар Эндо) и инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течение 18-24 ч. На среде №4 E.coli образуют, как правило, характерные малиновые колонии с металлическим блеском или без него, диаметром 2-4 мм. Подозрительные на принадлежность к E.coli колонии микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсевают на скошенную в пробирках среду № 1 и инкубируют при температуре (32,5 + 2.5)° С в течение 18-24ч. Из пробирок с чистой культурой делают пересевы на среды №14 (агар Симмонса) и №15 (бульон Хоттингера),а также используют для теста на цитохромоксидазу. Через 18-24 ч инкубации при (32,5 + 2.5)°С отмечают бактериальный рост или его отсутствие на средах №14 и №15.Утилизацию цитрата устанавливают по изменению цвета среды №14 из зеленого в синий.Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности среды №15 при добавлении реактива Ковача или Эрлиха.

Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано Escherichia coll.

2.2.2 ИСПЫТАНИЕ НА ВИДЫ Salmonella

1мл обогащенной культуры на среде №3 вносят в пробирку с 10 мл среды №12 (селенитовая среда) и инкубируют при (32,5 + 2,5)°С в течение 16-18 ч. Делают пересев петлей на среду №5 (висмут-сульфит агар) и инкубируют при температуре (32,5 + 2.5)°С в течение 24-48 часов. На среде №5 Salmonella образует, как правило, типичные черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом участок среды под колонией прокрашивается в черный цвет. Подозрительные на принадлежность к Salmonella колонии микроскопируют и при обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсевают на среду №13 (трехсахарный агар с солями железа),нанося большое количество культуры петлей сначала на скошенную часть агара,а потом уколом в столбик. Параллельно ставят тест на цитохромоксидазу, используя чистую культуру со среды №1.Через 18-24 часа инкубации при (32,5 + 2.5)°С отмечают изменение цвета среды из красного в желтый только в столбике питательной среды. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода — типичном признаке видов Salmonella.

Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза,не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано Salmonella.

2.3. Питательные среды и реактивы

1. Среда №11 (лактозный бульон) — для предварительного обогащения энтеробактерий

Пептон ферментативный сухой — 8 г

Вода дистиллированная — 1000 мл

рН после стерилизации 6,9 + 0,1

2. Среда №12 (селенитовая среда сухая) — для накопления и выделения сальмонелл.

Готовят согласно прописи на этикетке.

З. Среда №13 (трехсахарный агар с солями железа) — для выявления сероводорода

Мясной экстракт — З г

Дрожжевой экстракт — З г

Железа сульфат — 0,2 г

Натрия хлорид — 5 г

Натрия тиосульфат — 0,3г

Феноловый красный — 0,024г

Вода дистиллированная -1000 мл

Рн после стерилизации 7.3 + 0.2. Разливают в пробирки по 5-7 мл. Стерилизуют при 121°С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2-2,5 см.

4. Среда №14 (цитратный агар Симмонса)

Натрия хлорид — 5 г

Магния сульфат — 0,2г

Аммония дигидрофосфат — 1 г

Калия гидрофосфат — 1 г

Натрия цитрат — Зг

Бромтимоловый синий — 0,08г

Вода дистиллированная — 1000мл

рН после стерилизации 7,2 + 0.1

Приготовление: агар расплавляют при нагревании в свежеприготовленной дистиллированной воде. Все соли сначала растворяют в небольшом объеме воды, затем раствор добавляют к расплавленному агару и доводят водой до 1000 мл. Устанавливают рН, добавляют индикатор в виде 0,2% водного раствора в объеме 40 мл, хорошо перемешивают и разливают в пробирки по 5-7 мл. Стерилизуют при 121°С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2-2,5 см.

5. Среда №15 (бульон Хоттингера) — для определения индола

Примечание: * — для испытания на микробиологическую чистоту можно использовать аналогичные сухие питательные среды отечественных и зарубежных производителей после их валидации.

В пробирку со средой №15, в которой выросла исследуемая культура, вносят 0,5 мл реактива Ковача или Эрлиха и слегка встряхивают. При наличии индола наблюдают появление красного кольца на поверхности среды в пробирке.

Спирт амиловый или изоамиловый — 75 мл

Пара-диметиламинобензальдегид — 5 г

Кислота хлористоводородная, конц. — 20 мл

Навеску альдегида растворяют в спирте при легком нагревании (в водяной бане при 50-55°С), остужают и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте. Реактив должен быть желтого цвета.

Спирт этиловый 96% — 95 мл

Пара-диметиламинобензальдегид — 1 г

Кислота хлористоводородная, конц. — 20 мл

Навеску альдегида растворяют в спирте и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте.

РАЗДЕЛ 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРИЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Лекарственные средства, обладающие антимикробным действием, могут подавлять рост отдельных видов бактерий и грибов. Если исследуемое лекарственное средство оказывает ингибирующее действие на микроорганизмы, которые выявляют в нестерильных лекарственных средствах, необходимо адекватно инактивировать его во избежание неправильной оценки результатов испытания на микробиологическую чистоту. Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных средств проводят с использованием тест-микроорганизмов, полученных из Государственных коллекций.

3.1 ПОДГОТОВКА ТЕСТ-ШТАММОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРИЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Bacillus cereus ATCC1 10702 (NCTC2 8035)

Escherichia coli ATCC 25922

Pseudomonas aeruginosa ГИСК4 453

Staphylococcus aureus ATCC 6538-P(FDA3 209-P)

Candida albicans ATCC 885-653

Aspergillus niger BKM5 F-1119

ATCC1 — Американская коллекция типовых культур

NCTC2 — Национальная коллекция типовых культур, Великобритания

FDA3 — Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств, США ГИСК4 — Всероссийский музей патогенных бактерий (ГИСК им. Л.А. Тарасевича), Россия

ВКМ5 — Всероссийская коллекция микроорганизмов РАН, Россия

Тест-штаммы В. cereus, E. coli, P. aeruginosa, S. aureus получают из Государственной Коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Штамм С.albicans получают из Российского Микологического Центра (г. Санкт-Петербург), штамм A.niger — из ВКМ-Всероссийской Коллекции микроорганизмов РАН (г. Москва). Культуры тест-микероорганизмов могут быть получены также из ВКПМ — Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов. Используемые тест-штаммы должны быть типичными по культурально-морфологическим и биохимическим свойствам.

Тест-штаммы бактерий хранят при температуре (5 + 1)° С в лиофилизированном состоянии или под слоем стерильного вазелинового масла на среде Романова следующего состава:

Панкреатический гидролизат казеина 8.0 г

Натрия хлорид 5.0 г

Вода дистиллированная 100.0 г

рН после стерилизации 7.1 + 0.1

Тест-культуру C.albicans хранят под слоем вазелинового масла на среде №2 (агар Сабуро), в которой количество агара уменьшено до 1%. Тест-культуру A.niger хранят на среде №2 (агар Сабуро) (Госфармакопея, вып.2, с.200), делая пересевы через каждые 3 месяца. Лиофилизированную культуру тест-штамма из ампулы или культуру со среды хранения переносят в пробирки с питательным бульоном: среда №8 для бактерий, жидкая среда Сабуро — для C.albicans. Посевы на среде N8 инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течении 18-24ч, посевы на жидкой среде Сабуро — при температуре (22.5 + 2.5)°С в течение 48ч — для C.albicans. Посевы A.niger на среде №2 инкубируют при температуре (22.5 + 2.5)°С до появления черных или темнокоричневых экзогенных спор (конидий) в течении 5-7 сут.

Перед определением антимикробного действия нестерильных лекарственных средств культуры тест-штаммов бактерий отсевают на среду №8 (питательный бульон) и инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течение 18-24 ч.

Культуры грибов выращивают заранее: C.albicans — на жидкой среде Сабуро за 48 ч, а A.niger — на среде N2 за 5-7 сут. до начала определения.

3.2 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РАСТВОРЫ

(Государственная фармакопея XI издания, выпуск 2, с. 193, 201, 208-209)

Среда №8 — для выращивания бактерий.

Жидкая среда Сабуро — для выращивания Candida albicans.

Среда №2 (агар Сабуро) — для выращивания Aspergillus niger.

Среды №№3-5 — для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Среда №9 — для идентификации Pseudomonas aeruginosa.

Среда №10 — для идентификации Staphylococcus aureus.

Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном, рН 7.0.

3.3 ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

Готовят разведения лекарственного средства 1:10, 1:20, 1:50, 1:100, 1:200, 1:500, используя фосфатный буферный раствор (для приготовления эмульсий в раствор добавляют не более 5% Твина-80).

Бульонные культуры бактерий и C.albicans разводят фосфатным буферным раствором не менее, чем 1:1000. Культуру A.niger смывают со скошенного агара фосфатным буферным раствором с 0.05% Твина-80. Определяют количество конидий в 1 мл смыва, используя камеру Горяева или чашечный агаровый метод, и разводят до концентрации 103 — 104 КОЕ/мл.

Испытание проводят представленными в 3.3.1. и 3.3.2. методами определения антимикробного действия.

3.3.1 МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА ГОСФАРМАКОПЕИ XI

Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1мл в чашки Петри диаметром 90 мм, в одни из которых добавляют по 0.2 мл взвеси культуры B.cereus, a в оставшиеся — по 0.2 мл культуры C.albicans и A.niger. В чашки с B.cereus вносят по 7-10мл расплавленной среды №1 при температуре (47.5 + 2.5)°С, в чашки с культурами C.albicans и A.niger — то же количество среды №2.

Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1мл в пробирки с 10 мл жидкой среды — №3 и №8. В пробирки со средой №3 добавляют по 1мл взвеси культуры E.coli, в пробирки со средой №8 — по 1мл взвеси культур P.aeruginosa и S.aureus, каждую отдельно. В контрольные чашки и пробирки вместо разведении лекарственного средства вносят такое же количество буферного раствора.

Посевы на средах №1, 3, 8 инкубируют при температуре (32.5 + 2.5)°С в течение 2 сут (среды №3, 8) и 5 сут.(среда №1). Посевы на среде №2 инкубируют при температуре (22.5 + 2.5)°С в течение 5 сут. В случае, если при внесении лекарственного средства в жидкие питательные среды (№3, №8) образуется помутнение, препятствующее учету результатов, делают пересев со среды №3 на среду №4 (агар Эндо), а со среды №8 — на среды №9 и № 10. При росте типичных колоний E.coli (среда №4), P.aeruginosa (среда №9) и S.aureus (среда №10) отмечают наличие роста тест-микроорганизма.

3.3.2 МЕТОД РЕПЛИКАЦИЙ (для водонерастворимых лекарственных средств)

В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каждого разведения исследуемого лекарственного средства. В контрольные чашки вносят по 1 мл растворителя, который используют для получения разведения. В чашки Петри (как в эксперименте, так и в контроле) добавляют по 15-20 мл расплавленной и охлажденной до (47.5 + 2,5)° С среды №1, в другие — такое же количество среды №2 и быстро перемешивают. После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденсата с поверхности среды.

На поверхность агара бактериологической петлей или репликатором наносят бляшками инокулят каждого тест-штамма бактерий и грибов на среды №1 и №2 соответственно.

Чашки со средой №1 инкубируют при температуре

(32.5 + 2.5)°С в течение 48ч. Чашки со средой №2 инкубируют при температуре (22.5 + 2.5)°С в течение 3-5 сут.

Учет результатов. После окончания сроков инкубации посевов (появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках без лекарственного средства) отмечают наличие или отсутствие роста тест-штаммов бактерий и грибов на средах, в которые вносили различные разведения лекарственного средства.

Наличие такого же роста тест-микроорганизма, как в контроле, обозначают знаком «+»,отсутствие роста — знаком «-», слабый или замедленный рост — знаком «+».

Отсутствие роста тест-микроорганизма на среде с препаратом свидетельствует о том, что исследуемый препарат в данном разведении обладает антимикробным действием в отношении определенного тест-микроорганизма.

3.3.3 НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ

Для устранения антимикробного действия лекарственного средства используют различные методы: 1) увеличивают разведение лекарственного средства; 2) добавляют необходимое количество соответствующего специфического инактиватора, нейтрализующего антимикробное действие лекарственного средства, но не угнетающего рост микроорганизмов-контаминантов (например, бета-лактамазу — для пенициллинов и цефалоспоринов, пара-аминобензойную кислоту — для сульфаниламидов); 3) применяют неспецифнческий инактиватор следующего состава, используемого в качестве растворителя:

Лецитин яичный — З г

L-гистидина гидрохлорид — 1 г

Пептон (мясной или казеиновый) — 1 г

Натрия хлорид — 4.3 г

Калия фосфат однозамещенный — З.6 г

Натрия фосфат двузамещенный — 7.2 г

Воды дистиллированной — 1000.0 мл

Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121°С в течение 15 мин. Если антимикробное действие полностью не устраняется, увеличивают концентрацию Твина-80 или лецитина.

Директор ИГКЛС НЦЭГКЛС Минздрава России, профессор, академик МАИ — Н. С. Евтушенко.

Председатель Государственного Фармакопейного комитета, профессор, чл.-корр. РАМН А. П. Арзамасцев.

Главный Ученый секретарь Государственного Фармакопейного комитета, доктор фарм. наук В. Л. Багирова.

Подобные документы

Внутриаптечный контроль качества лекарственных средств. Химические и физико-химические методы анализа, количественное определение, стандартизация, оценка качества. Расчет относительной и абсолютной ошибок в титриметрическом анализе лекарственных форм.

курсовая работа [308,5 K], добавлен 12.01.2016

Особенности анализа полезности лекарств. Выписка, получение, хранение и учет лекарственных средств, пути и способы их введения в организм. Строгие правила учета некоторых сильнодействующих лекарственных средств. Правила раздачи лекарственных средств.

реферат [16,3 K], добавлен 27.03.2010

Общая характеристика микозов. Классификация противогрибковых лекарственных средств. Контроль качества противогрибковых лекарственных средств. Производные имидазола и триазола, полиеновые антибиотики, аллиламины. Механизм действия противогрибковых средств.

курсовая работа [162,8 K], добавлен 14.10.2014

Этапы разработки лекарственных препаратов. Цель проведения клинических исследований. Их основные показатели. Типовые дизайны клинического исследования. Испытание фармакологических и лекарственных средств. Исследование биодоступности и биоэквивалентности.

презентация [579,5 K], добавлен 27.03.2015

Структура и функции контрольно-разрешительной системы. Проведение доклинических и клинических исследований. Регистрация и экспертиза лекарственных средств. Система контроля качества изготовления лекарственных средств. Валидация и внедрение правил GMP.

реферат [88,2 K], добавлен 19.09.2010

Понятие стерильных лекарственных форм. Возможные источники загрязнения. Требования, предъявляемые к стерильным лекарственных формам. Требования к контролю качества. Постадийный контроль качества. Анализ современных методов контроля лекарственных средств.

курсовая работа [76,8 K], добавлен 21.11.2019

Помещение и условия хранения фармацевтической продукции. Особенности контроля качества лекарственных средств, правила Good Storage Practice. Обеспечение качества лекарственных препаратов и средств в аптечных организациях, их выборочный контроль.

реферат [33,6 K], добавлен 16.09.2010

Источник