Исследование фотостабильности лекарственного средства является неотъемлемой частью

Климатическая камера постоянных условий для исследований стабильности

Исследование фотостабильности лекарственных средств

Чтобы гарантировать высокие стандарты безопасности для новых действующих веществ и лекарственных средств, фармацевтические компании проводят комплексные исследования фотостабильности.

Прежде чем действующее вещество и лекарственное средство попадут на рынок, они проходят комплексные исследования. Ведь как раз исследование лекарственных средств попадает под строгие стандарты безопасности. Исследования стабильности фармацевтических препаратов в соответствии с директивами ICH (Международной конференции по гармонизации) являются важной составляющей допуска и регистрации продукта, без прохождения исследования стабильности продукт не будет допущен. Исследования направлены на определение срока годности фармацевтических препаратов при определенных условиях хранения.
Исследования фотостабильности согласно GMP (Надлежащей практике производства) предназначены для того, чтобы проверять новые действующие вещества и лекарственные средства на их устойчивость к действию света, например, чтобы подтвердить соответствующим образом, что действующие вещества и лекарственные средства не изменяются недопустимым образом, когда подвергаются воздействию света. Для эффективного проведения испытаний приоритетное значение имеют стабильные условия освещения и температурные условия. «При проведении испытаний необходимо поддерживать стабильную температуру, и интенсивность света должна достигать заданного значения согласно директивам ICH», — говорит биолог д-р Йенс Тильманн, отвечающий за рост и консервацию в компании BINDER. Для проведения различных исследований многие компании и исследовательские институты применяют климатические камеры постоянных условий серии KBF LQC от BINDER. «Эти камеры отличаются высокой точностью температуры и, кроме того, в них использован уникальный принцип освещения», — говорит Тильманн. Запатентованная система контроля освещения Light Quantum Control (LQC) от BINDER дает возможность точной фотометрии с помощью независимого управления светодозировкой УФ-A и видимым светом благодаря свободно размещаемым сферическим 3D-датчикам. Благодаря световым кассетам с возможностью разнообразного позиционирования климатическая камера постоянных условий имеет однородное распределения силы света по всей полезной поверхности. Когда достигнута необходимая интенсивность света, камера автоматически отключается. При этом без влажности могут применяться температуры от 0 °C до 70 °C. В климатическом режиме (с влажностью) диапазон температуры составляет от 10 °C до 70 °C, относительная влажность регулируется от 10 % отн. вл. до 80 % отн. вл.

Валидация и квалификация в контролируемом окружении

Квалификация оборудования в фармацевтической промышленности является важным элементом обеспечения качества и требуется на законодательном уровне. Данная информационная статья дает обзорную информацию о том, как валидация и квалификация соотносятся с GMP1, и описывает общую процедуру квалификации с основными этапами: квалификацией проекта (DQ)2, установочной квалификацией (IQ)3, операционной квалификацией (OQ)4 и квалификацией эксплуатационных характеристик (PQ)5. При этом в центре внимания находится квалификация устройств. Также кратко затрагивается валидация компьютеризированных систем.

При проведении испытаний необходимо поддерживать стабильную температуру, и интенсивность света должна достигать заданного значения согласно директивам ICH

говорит биолог д-р Йенс Тильманн, отвечающий за рост и консервацию в компании BINDER

Источник

Клинические исследования лекарственных препаратов

Необходимость испытаний

Без клинических исследований нельзя предугадать, какое влияние окажет новый лекарственный препарат на организм человека.

Эксперименты на животных (доклинические исследования) позволяют сделать приблизительные выводы о воздействии лекарства. Вот почему исследования на людях становятся единственным способом получения доказательств безопасности и эффективности препарата.

Цель и задачи

Клиническое исследование лекарств – это научный эксперимент, проводимый на людях (добровольцах, пациентах) с целью установления лечебного эффекта и безопасности нового препарата или для расширения представления о существующем лекарстве.

Из цели вытекает ряд задач:

определить разовую, суточную, курсовую дозу препарата;

установить фармакокинетические показатели:

• способ введения вещества,
• скорость поступления из места введения в кровь,
• уровни концентрации в системном кровотоке, органе-мишени и тканях;
• период достижения максимальной концентрации,
• время и способ выведения из организма;

получить фармакодинамические показатели:

• механизм действия препарата и фармакологические эффекты,
• силу, длительность, вид воздействия вещества,
• реакцию организма на повторное введение,
• побочные реакции и осложнения,

составить перечень противопоказаний;

исследовать взаимодействие с иными лекарственными препаратами и пищевыми продуктами;

получить сравнительные показатели с существующими аналогичными препаратами.

Нормативно-правовая база

Временные рамки

На создание препарата, включая клинические испытания отводится, в среднем, больше 10 лет. В определённых обстоятельствах допускают ускоренную регистрацию препарата. Международные требования разрешают это в отношении препаратов, необходимых для лечения тяжёлых заболеваний, когда варианты терапии ограничены.

В России Министерство здравоохранения допускает ускоренную регистрацию препарата, если он нужен при возникновении и ликвидации чрезвычайной ситуации. В данном режиме были зарегистрированы лекарственные препараты для лечения коронавируса и вакцины с целью профилактики заражения.

Место проведения

Чаще всего заказчиком клинических исследований становится фармацевтическая компания. Она заинтересована в быстром наборе пациентов и в качественном эксперименте. Поэтому клиники и центры с высококвалифицированными специалистами и с большим количеством пациентов, подходящих под критерии включения в исследование, становятся предпочтительными при выборе места научной деятельности. Наибольшее количество испытаний проводится в крупных клиниках, в федеральных и региональных научно-исследовательских центрах, высших медицинских учебных заведениях. Часто фармацевтические компании обращаются за услугами по организации и проведению клинических испытаний к контрактным исследовательским организациям (КИО/CRO), обладающим квалифицированными сотрудниками и значительным опытом при проведении клинических и других видов медицинских исследований, например, наблюдательных (неинтервенционных) программ.

Участники

Клинические исследования осуществляются специалистами по клиническим исследованиям – научными сотрудниками, врачами, обладающих требуемыми квалификацией и опытом.

Цель исследования определяет критерии отбора участников. Выделяются категории, которым противопоказано испытание. Организатор исследований обязуется обеспечить добровольцев необходимой медицинской помощью.

Важный принцип клинических испытаний – добровольность.

Он реализуется двумя положениями:

• пациент имеет право отказаться от исследования в любой момент.
• участие пациента может быть только добровольным;

Второй фундаментальный принцип клинических исследований – процедура получения добровольного информированного согласия на участие в исследовании. Для этого существуют нормативные требования к перечню информации, которую необходимо донести до испытуемого. Информирование добровольца не должно пестрить множеством специальных терминов, затрудняющих восприятие информации. На время информирования отводится столько, сколько требуется для принятия обдуманного решения.

Человек узнаёт цель, задачи, сроки, особенности исследования, возможные последствия и т.п. д. Потенциальный участник письменно подтверждают факт ознакомления с информацией. Подпись, поставленная пациентом в информационном листке, является доказательством добровольного согласия на участие в клиническом исследовании.

Этапы исследования

Выделяется четыре фазы клинических испытаний. Каждая из них может оказаться последней в случае появления признаков опасности препарата для здоровья человека.

• 1 фаза – как правило, на малой группе здоровых людей (добровольцев). Обычно это 20 — 100 человек.
• 2 фаза — на более многочисленной группе пациентов без сопутствующих заболеваний.
• 3 фаза — на сотнях и тысячах больных с сопутствующими заболеваниями.
• 4 фаза — крупномасштабный мониторинг после того, как препарат прошёл регистрацию, получил одобрение и поступил в продажу.

Первая фаза

Приоритетная задача

Главная задача 1 фазы клинических испытаний состоит в подтверждении безопасности исследуемого препарата. Акцент ставится не на эффективность, а на безопасность. Исследователи оценивают переносимость препарата человеческим организмом и выявляют неопасную максимальную дозу вещества.

Участники

Это этап, сопряжённый с риском. Вот почему участники 1 фазы клинических исследований должны иметь крепкое здоровье. Только для таких проверка препарата сведёт к минимуму риск для здоровья. Десятки добровольцев отбираются и проходят полное обследование. Во время эксперимента они находятся под постоянным наблюдением врачей.

Процесс

Исследуемая субстанция предлагается добровольцам в различных дозах. Параллельно берутся анализы, делаются электрокардиографические, ультразвуковые и другие методы исследования.

Учёные получают ответы на ряд вопросов.

• как усваивается лекарство в организме;
• сколько времени циркулирует в крови;
• как быстро достигает органа-мишени;
• когда достигает максимальной концентрации;
• как быстро концентрация вещества в крови снижается;
• каким образом вещество выводится наружу;
• какой способ выведения – почечный или внепочечный – преобладает.

По фармакодинамике:

• каковы эффекты применения лекарственного вещества, то есть какое действие оказывается на клетки-мишени — подавляющее, стимулирующее, раздражающее, разрушающее, замещающее;
• каковы общая и другие виды токсичности;
• есть ли нежелательные реакции, какие, когда появляются.

Согласно протоколу исследования добровольцу сначала вводится низкая доза препарата. После тщательных наблюдений и обследований начинается процесс постепенного возрастания дозы. Увеличивается и период приёма лекарства. За испытуемым осуществляется непрерывное наблюдение. По многочисленным пробам устанавливается максимально допустимая доза.

Итог

По статистике около 50% препаратов из тех, которые проверяются на 1 стадии, оказываются токсичными или гипотоксичными для человека и по этой причине снимаются с дальнейших клинических исследований.

Если препарат подтвердил безопасность, начинается 2 фаза клинических исследований.

Вторая фаза

Участники

Для второй стадии клинических испытаний отбираются сотни человек со сходной патологией и без выявленных сопутствующих заболеваний. Различия по возрасту, полу, расе учитываются при формировании групп пациентов.

Набирая группу добровольцев, учёные стараются смоделировать заболевание в чистом виде. Пациенты должны иметь только интересующее исследователей заболевание. Тогда станет возможным оценить действие препарата по отношению к конкретному патологическому процессу.

Приоритетная задача

Данная фаза исследований не менее ответственна предыдущей. Безопасность лекарства доказана на здоровых людях. А какова будет реакция у человека с заболеванием?

Ставится новая задача — выявление безопасности и эффективности лекарственного средства на определённом контингенте больных.

Процесс

На данном этапе осуществляются исследования по подбору дозы препарата для достижения терапевтического эффекта: разовой, суточной, курсовой. Устанавливается кратность приёма. При испытании дозы многократно корректируются.

Также препарат должен доказать лечебный эффект в сравнении с плацебо (веществом, не имеющим активной субстанции).

Эффект плацебо состоит в том, что пациент может так понадеяться на лекарство, что самовнушение окажет положительное влияние на самочувствие, и результаты внушения ошибочно будут приняты за лекарственное воздействие. Вот почему помимо тестируемого препарата пациентам дают фиктивное лекарство (пустые таблетки, инъекции, мази).

Участники эксперимента подписывают документ, где соглашаются принимать препарат, не зная настоящий он или нет. Какой будет таблетка неизвестно даже врачу. Информацией владеет только организатор клинического исследования. Такой метод называется двойным слепым: о виде препарата не знает ни врач, ни пациент. Нужно исключить из анализа клинических испытаний субъективный фактор, способный исказить результаты.

Итог

Если эффективность и безопасность препарата на 2 фазе подтвердились, учёные получают разрешение на 3 стадию клинических исследований. До неё доходят единицы из заявленных лекарств.

Источник

Регламент

S10 Оценка фотобезопасности лекарственных средств

МЕЖДУНАРОДНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ ПО ГАРМОНИЗАЦИИ ТЕХНИЧЕСКИХ ТРЕБОВАНИЙ К РЕГИСТРАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА

Гармонизированное трехстороннее руководство ICH

Оценка фотобезопасности лекарственных средств

S10

Действующая версия 4 этапа

от 13 ноября 2013 г.

Данное Руководство было разработано соответствующей Экспертной рабочей группой ICH, оно было представлено на рассмотрение регуляторным органам в рамках процесса ICH. На 4 этапе процесса финальный проект рекомендован для принятия регуляторными органами Европейского Союза, Японии и США.

S10
История документа

Код	История	Дата
S10	Одобрение Руководящим комитетом в рамках 2 этапа и вынесение на общественное обсуждение.	15 ноября 2012 г.

Текущая версия в рамках 4 этапа

S10

Одобрение Руководящим комитетом в рамках 4 этапа и рекомендация к принятию тремя регуляторными органами ICH.

13 ноября 2013 г.

Правовое уведомление: На данный документ распространяются авторские права. Его использование, воспроизведение и включение в другие труды, адаптируемые, изменяемые, переводимые либо распространяемые в рамках общественной лицензии, возможно при условии наличия ссылки в документе на авторские права ICH. В случае адаптации, модификации либо перевода документа на другой язык должны быть предприняты разумные усилия к тому, чтобы четко указать на то, что изменения были сделаны на основе оригинального документа. Следует избегать впечатления о том, что подобная адаптация, изменение, либо перевод оригинального документа была инициирована либо спонсирована ICH.

Данный документ представлен «как есть», без предоставления каких-либо гарантий. Ни ICH, ни авторы оригинального документа в любом случае не несут ответственности за любые претензии, ущерб либо иные обязательства, возникающие в связи с применением данного документа.

Вышеуказанные разрешения не имеют отношения к информации, предоставляемой третьими сторонами. Следовательно, в случае, если авторское право на документ закреплено за третьим лицом, у владельца авторских прав должно быть получено разрешение на его воспроизведение.

Оценка фотобезопасности лекарственных средств

Гармонизированное трехстороннее руководство ICH

По достижении 4 этапа процесса ICH в рамках встречи Руководящего комитета ICH 13 ноября 2013 г., данное руководство рекомендовано к принятию тремя регуляторными органами ICH

Оценка фотобезопасности лекарственных средств

1. Введение

1.1. Цели руководства

Цель данного документа состоит в представлении рекомендаций в отношении международных стандартов оценки фотобезопасности и гармонизации оценки в рамках программы клинических исследований на человеке и регистрации лекарственных средств. Оценка включает факторы инициации и механизмы дополнительной оценки фотобезопасности и должны рассматриваться в контексте ICH M3(R2), Раздел 14 об испытаниях фотобезопасности (Ссылка 1). В данном руководстве должна быть минимизирована вероятность наличия существенных различий рекомендаций по оценке фотобезопасности в разных регионах.

Данное руководство состоит из нескольких разделов. Во 2 разделе представлены факторы, которые следует учитывать при оценке фотобезопасности. Раздел 3 содержит информацию о доклинических анализах фотобезопасности, но в нем не отражены специфические стратегии испытаний. В разделе 4 представлена оценка клинических данных о фотобезопасности. В Разделе 5 – стратегии определения принципов оценки фотобезопасности препаратов, вводимых путями, необходимыми для достижения системных концентраций либо кожным путем при помощи исследований и тестов, описанных в Разделах 2, 3 и 4.

Следует учитывать использование данных исследований без использования животных или клинические данные оценки фотобезопасности, что может позволить сократить необходимость использования животных в соответствии с принципами 3R (Replacement/Reduction/Refinement – замена/сокращение/улучшение).

1.2. Справочная информация

В руководстве ICH M3(R2) представлена определенная информация относительно сроков оценки фотобезопасности в рамках клинической разработки. Рекомендовано проводить начальную оценку потенциальной фототоксичности и при необходимости – экспериментальную оценку до применения препарата у большого числа участников (3 фаза). Аналогичным образом, в руководстве ICH S9 (ссылка 2) описано время анализов фотобезопасности для препаратов, применяемых в онкологии. Однако ни в ICH M3(R2), ни в ICH S9 не представлено специфической информации относительно стратегии испытаний. В настоящем Руководстве ICH S10 представлены дополнительные данные о сроках проведения испытаний фоточувствительности и о возможных стратегиях оценки.

1.3. Область применения руководства

Данное руководство в целом распространяется на новые активные фармацевтические ингредиенты (АФИ), клинические формулы, содержащие новый состав вспомогательных веществ для кожного применения (включая кожные пластыри) и фотодинамические терапевтические препараты.

Специального руководства для лекарственных средств, вводимых глазным путем не существует, поскольку неизвестна надежность подходов in vitro оценки глазной фототоксичности и отсутствуют стандартные подходы in vivo по оценке фототоксичности препаратов, вводимых глазным путем (см. Примечание 1).

Разработка препаратов фотодинамической терапии, как правило, предполагает, что фотохимическая реактивность является неотъемлемым элементом их фармакологического действия, поэтому дополнительной оценки их фототоксичности, как правило, не требуется. Однако оценка токсикокинетических характеристик и распределения в тканях препаратов фотодинамической терапии оправдана в целях надлежащего управления рисками у пациентов.

Данное руководство в целом не распространяется на пептиды, белки, конъюгаты антител либо олигонуклеотиды. Кроме того, данное руководство не распространяется на компоненты зарегистрированных препаратов кроме случаев появления новых оснований для беспокойства в отношении АФИ либо вспомогательного вещества (например, переход на новую лекарственную форму – от таблеток к крему для местного применения).

1.4. Общие принципы

Оценка фотобезопасности лекарственного средства – интегрированный процесс, который может включать оценку фотохимических характеристик, данных доклинических исследований и информацию о безопасности для человека. Оценка фотобезопасности направлена на определение целесообразности введения мер по минимизации риска для предотвращения нежелательных явлений у человека.

В рамках испытаний фоточувствительности представлено обсуждение четырех различных эффектов: фототоксичности, фотоаллергии, фотогенотоксичности и фотоканцерогенности. Испытания фотогенотоксичности (Примечание 2) и фотоканцерогенности (Примечание 6 ICH M3 (R2)) в настоящее время не рассматриваются как актуальные при анализе лекарственных средств для человека. В данном руководстве представлены только данные о фототоксичности и фотоаллергенности, определение которых дано ниже:

— Фототоксичность (фотораздражение): острый ответ на фотореактивное химическое вещество, обусловленный воздействием света.

— Фотоаллергия: Иммунологически опосредованная реакция на химическое вещество, инициируемая формированием фотопродуктов (например, аддукты белков) после фотохимической реакции.

Фотосенсибилизация – общий термин, используемый время от времени в качестве определения для всех тканевых реакциях, опосредованных воздействием света. Однако в целях проведения четкого различия между фотоаллергией и фототоксичностью в рамках данного руководства термин фотосенсибилизация не применяется.

Для подтверждения фототоксичности и/или фотоаллергенности химического вещества должны учитываться следующие характеристики:

— Абсорбция света в диапазоне волн естественного солнечного света (290-700 нм);

— После абсорбции УФ – видимой области спектра образуются активные частицы;

— В достаточной мере распространяется на ткани, подверженные свету (например, кожу, глаза).

Если одно или несколько из этих условий не соблюдены, препарат, как правило, не представляет угрозы с точки зрения прямой фототоксичности. Однако повышение чувствительности кожи к свету может быть обусловлено и непрямыми механизмами, изучение которых не является предметом рассмотрения настоящего руководства (см. также Раздел 2.4).

2. Факторы, требующие учета при оценке фотобезопасности

2.1. Фотохимические свойства

Начальным условием оценки фотореактивного потенциала является способность вещества абсорбировать фотоны при любой длине волны в диапазоне от 290 до 700 нм. Вещество с молярным коэффициентом поглощения (МКП) свыше 1000 л моль -1 см -1 при любой длине волны в диапазоне от 290 до 700 нм (Ссылка 3) не считается реактивным в той степени, чтобы вызывать прямую фототоксичность (см. Дополнительную информацию в Примечании 3).

Возбуждение молекул светом может привести к возникновению активных форм кислорода (АФК), включая супероксид анион и синглетный кислород при помощи механизмов передачи энергии. Несмотря на то, что фотореактивность может привести к другим исходам на молекулярном уровне (например, к формированию фотоаддуктов либо цитотоксических фотопродуктов), даже в этих случаях параллельно происходит образование АФК. Таким образом, АФК после воздействия облучения светом УФ-видимого спектра может стать индикатором потенциала фототоксичности.

Испытания фотостабильности (Ссылка 4) также могут указывать на потенциальную фотореактивность. Однако не все фотореактивные вещества обнаруживаются при таких условиях и фоторазложение как таковое не предполагает фототоксичности. Следовательно, испытания фотостабильности по отдельности не следует использовать для установления целесообразности дальнейших исследований фотобезопасности.

Оценка фотохимических свойств должна проводиться с использованием высококачественных научных стандартов, при этом должны быть доступны документы о сборе данных либо в соответствии с принципами Надлежащей лабораторной практики/ Надлежащей производственной практики (GLP/GMP).

2.2. Тканеваое распределение / фармакокинетика

Концентрация фотореактивного химического вещества в тканях под воздействием света – очень важный фармакокинетический параметр, позволяющий определить вероятность фототоксической реакции. Концентрация зависит от ряда факторов, таких как концентрация в плазме, тканевая перфузия, разделение из сосудистых в интерстициальные и клеточные компартменты и связывание, удержание и накопление химического вещества в ткани. Продолжительность воздействия зависит от уровня клиренса в зависимости от периода полувыведения в плазме и тканях. В совокупности данные параметры определяют среднее время удержания фотореактивного вещества в ткани.

Связывание, удержание либо накопление вещества в ткани не является критически важным параметром, определяющим фототоксическую реакцию. Если молекула обладает фотореактивными свойствами, она может привести к фототоксической реакции в концентрации, достигаемой в плазме либо в интерстициальной жидкости. Однако вещества с более длительным периодом полувыведения в плазме, более длительным средним временем удержания в тканях, подверженных солнечному свету либо с более высокими соотношениями концентраций в ткани и в плазме, что с большей долей вероятности может привести к фототоксической реакции, по сравнению с веществами с более коротким периодом полувыведения, временем удержания и более низкими соотношениями концентраций в ткани и в плазме. В дальнейшем, чем длиннее концентрация вещества на уровне выше критического для фотохимической реакции, тем дольше сохраняется риск фототоксичности.

Несмотря на научную обоснованность порога тканевых концентраций, ниже которого риск фототоксических реакций был бы незначительным, в настоящее время нет данных, позволяющих определить общие пороговые значения для всех веществ. Несмотря на это в индивидуальном порядке возможно установить, что дальнейшая оценка фотобезопасности не требуется, учитывая фактический либо ожидаемый уровень препарата в тканях у человека и принимая во внимание обсуждавшиеся выше факторы. Возможные примеры: 1) препарат с очень низкими общими системными концентрациями либо 2) препарат с очень коротким периодом полувыведения либо периодом нахождения в ткани.

Связывание вещества с компонентами ткани (например, с меланином, кератином) – это тот механизм, при помощи которого происходит удержание и/или накопление препарата в тканях. Несмотря на то, что связывание с меланином может привести к повышению тканевых концентраций, опыт применения препаратов, связывающих меланин, свидетельствует о том, что само по себе такое связывание не представляет опасности с точки зрения фотобезопасности.

Исследование распределения в тканях при однократном введении у животных в разные моменты времени после введения, обычно позволяет получить достаточное представление об относительных соотношениях концентраций в тканях и плазме, времени удержания в тканях и потенциала удержания и накопления. Между временем проводимых оценок должны быть установлены интервалы, учитывающие период полувыведения препарата.

Вещества, активизируемые в видимом спектре и показывающие длительный период полувыведения во внутренних тканях, приводили к повреждению этих тканей при условии воздействия интенсивного света во время медицинских процедур. Следовательно, для веществ, активизируемых видимым спектром с высокой фототоксичностью in vivo либо подтвержденной фототоксичностью на основании их механизма действия, например, препаратов фотодинамической терапии, должно быть измерено распределение во внутренних тканях и период полувыведения для разных тканей. Препараты, абсорбирующие только УФ-лучи, либо имеющие короткий период полувыведения, могут представлять риск для внутренних тканей даже если они имеют свойства фотореактивности.

2.3. Особенности, связанные с метаболитами

Как правило, для метаболитов не проводят отдельную оценку фотобезопасности, поскольку в ходе метаболизма обычно не происходит образования хромофоров, существенно отличных от исходной молекулы.

2.4. Фармакологические свойства

Во многих случаях лекарственная фототоксичность обусловлена химической структурой препарата, а не его фармакологическими свойствами. Однако некоторые фармакологические свойства (например, иммуносупрессия, нарушение гомеостаза гемов) могут повысить чувствительность к воздействию света, например, раздражение кожи или образование опухолей на коже под воздействием УФ-лучей. Стратегии испытаний, представленные в данном документе, не учитывают типы косвенных механизмов. Некоторые из этих косвенных механизмов могут быть идентифицированы и проходить оценку в рамках других доклинических фармакологических испытаний токсичности, однако фототоксичность, обусловленная иными, непрямыми механизмами воздействия, становится очевидной только при применении препарата у человека.

3. Доклинические испытания фотобезопасности

3.1. Общие положения

Тщательно выбранные условия, учитывающие модель системы и воздействие соответствующего спектра облучения критически важны для доклинического анализа фоточувствительности. В идеале доклинические анализы должны отличаться высокой чувствительностью и специфичностью (т.е. низкий уровень ложноотрицательных и низкий уровень ложноположительных реакций). Однако учитывая стратегии оценки, описанные в данном документе, важно отметить, чтобы доклинические анализы безопасности показали высокую чувствительность и низкую частоту ложноотрицательных результатов (т.е. высокую прогностическую ценность отрицательного результата). Это связано с тем, что в случае отрицательных результатов анализа дальнейшую оценку фотобезопасности, как правило, не проводят. Существующие доклинические анализы как in vitro, так и in vivo, в первую очередь сконцентрированы на выявлении потенциальной фототоксичности, что не обязательно свидетельствует о клинически значимой фототоксичности.

Выбор условий облучения критически важен для анализов in vitro и in vivo. Естественное солнечное освещение обеспечивает наиболее широкий спектр светового воздействия, которому регулярно подвергается человек. Однако солнечный свет сам по себе недостаточно точно определен и зависит от многих факторов, таких как широта, высота, время года, время суток, погода. Кроме того, чувствительность кожи человека к естественному солнечному свету зависит от ряда отдельных факторов (например, тип кожи, участок тела, уровень загара). Различными организациями приводятся стандартные условия воздействия солнечного света. Такие стандарты (например, см. Ссылку 5) следует учитывать при оценке симуляторов солнечного света, а излучение и доза излучения должны быть нормализованы с учетом УФА-части применяемого спектра. Дозы УФА от 5 до 20 Дж/см 2 успешно применяются в исследованиях фототоксичности in vitro и in vivo в настоящее время. Эти дозы УФА сравнимы с дозами, достигаемыми в ходе длительного пребывания на солнце в летнее время в полуденные часы в зонах умеренного климата на уровне моря. У человека реакции солнечного ожога, вызываемые лучами УФВ, ограничивают общее время воздействия солнечного света. Однако в доклинических исследованиях фототоксичности объем УФВ излучения не должен ограничивать общую продолжительность облучения, но может быть ослаблен (частичная фильтрация) для достижения необходимых доз УФА, не снижая при этом чувствительности теста. УФВ лучи обычно проникают в кожу человека не дальше эпидермиса, тогда как УФА-лучи могут достигать капиллярной крови. Поэтому клиническая значимость для системных препаратов фотохимической активации УФВ лучами считается менее важной, чем активация лучами УФА. Однако облучение УФВ важно для лекарственных форм для топикального применения на участках, подвергаемых воздействию УФВ лучей.

Выбор и Процедура контроля за ходом доклинического (неклинического) исследования и обеспечением его проведения, сбора данных и представления результатов исследования согласно протоколу, стандартным операционным процедурам и настоящему стандарту. мониторинг соответствующих источников света (спектральное распределение, облучение и доза) и процедур должен быть четко описан в методологии исследований (например, Ссылка 6).

3.2. Испытания фотореактивности химическими методами

Если разработчик лекарственного средства предполагает проведение оценки фотореактивности, анализ должен быть квалифицирован за счет применения лекарственных веществ при соответствующих условиях, что позволит установить чувствительность анализа. К таким анализам принадлежит и анализ АФК (например, Ссылка 7). Данные указывают на то, что данный анализ имеет высокую чувствительность к выявлению веществ, обладающих прямым фототоксическим действием in vivo. При этом анализ отличается низкой специфичностью, характеризуясь высоким процентом ложноположительных результатов. Отрицательный результат анализа, проводимого при соответствующих условиях, означал бы очень низкую вероятность фототоксичности, при условии концентрации испытуемого вещества 200 мкм, а положительный результат (при любой концентрации) лишь указывает на необходимость дальнейшей оценки.

3.3. Испытания фототоксичности при помощи анализов in vitro

Целый ряд анализов in vitro разработан для оценки потенциала фототоксичности химических веществ. Некоторые анализы сертифицированы для применения при оценке лекарственных средств. Некоторые анализы подразумевают испытания на веществах, растворенных в питательной среде, подобные методы часто подходят для анализа активного ингредиента либо его вспомогательных веществ в составе лекарственных средств, в зависимости от их характеристик растворимости. Другие анализы предполагают прямое нанесение на поверхность препарата ткани и подходят для анализа препарата в лекарственной форме, предназначенной для местного применения.

Самым распространенным методом анализа фототоксичности in vitro является анализ фототоксичности связывания нейтрального красного 3Т3 (3T3 NRU-PT), в отношении которого имеется руководство Организации экономического сотрудничества и развития (ОЭСР) (Ссылка 6). Данный метод в настоящее время считается наиболее удачным скрининговым методом in vitro для растворимых веществ.

Несмотря на то, что формальные действия по валидации, проводившиеся в отношении данного метода Европейским центром валидации альтернативных методов (ECVAM) показали чувствительность 93% и специфичность 84%, опыт фармацевтической отрасли свидетельствует о существенно более низкой специфичности данного метода. Оригинальный протокол ОЭСР не был валидирован непосредственно для лекарственных средств. Таким образом, были предложены некоторые изменения в оригинальный протокол ОЭСР с учетом низкой специфичности лекарственных веществ (см. Примечание 4). Предложенные изменения подходят для анализа лекарственных средств. Чувствительность 3T3 NRU-PT высока, и если в данном анализе был достигнут отрицательный результат, вероятность фототоксичности вещества у человека крайне низка. Однако положительный результат анализа 3T3 NRU-PT не следует рассматривать в качестве индикатора вероятного клинического риска фототоксичности. Он, скорее, указывает на необходимость проведения дальнейшей оценки.

Линия клеток BALB/c 3T3 чувствительна к УФВ-лучам, и изначально рекомендованные условия облучения (ссылка 6) предполагают использование фильтров для ослабления волн длиной ниже 320 нм. Однако в зависимости от источника света и используемых фильтров соотношение УФВ и УФА-облучения может быть скорректировано таким образом, чтобы обеспечить возможность оценки УФВ-индуцированной фототоксичности в рамках данного теста. Фототоксичность, индуцированная УФВ-лучами редко представляет собой проблему в отношении лекарственных средств с системным воздействием, поскольку УФВ-лучи в минимальной степени проникают в эпидермис. Однако фототоксичность, индуцированная УФВ-лучами, более актуальна для топикальных препаратов. В случае компонентов топикальных препаратов, поглощающих преимущественно лучи диапазона при необходимости оценки in vitro может быть рассмотрено применение анализа 3T3 NRU-PT с измененными условиями облучения (см выше). В качестве альтернативы могут быть рассмотрены модели in vitro, позволяющие лучше переносить УФВ-лучи.

Восстановленные модели кожи человека с роговым слоем позволяют осуществлять анализ различных типов топикальных материалов от чистых химических веществ до конечных клинических составов. Анализы, проводимые на воссозданной человеческой коже, позволяют определить жизнеспособность клеток с облучением и без него. Эти анализы позволяют выявлять известные вещества, оказывающие острое фототоксическое воздействие на кожу. Однако чувствительность некоторых анализов может быть меньше, чем при исследовании на коже человека in vivo, где наименьшая концентрация препарата, приводящая к формированию положительного ответа, может быть выше, чем при анализе на коже человека in vivo. Следовательно, важно осознавать чувствительность выбранного анализа и по возможности корректировать условия проведения анализа соответствующим образом (например, исследование составов в более высокой дозировке, увеличение времени воздействия).

Не существует моделей in vitro, позволяющих провести специфическую оценку фототоксичности для глаз, несмотря на путь введения. Несмотря на то, что отрицательные результаты анализа 3T3 NRU-PT либо анализа на воссозданной коже человека могут свидетельствовать о низком риске, прогностическая ценность этих анализов в отношении фототоксичности для глаз не подтверждена.

3.4. Испытания фотобезопасности при помощи методов in vivo и системное введение

Испытания фототоксичности препаратов для системного введения проводились на ряде животных, в том числе, на морских свинках, мышах и крысах. Стандартного дизайна исследований не существует, поэтому в качестве оптимальной практики рекомендуется учитывать следующие факторы.

При выборе биологического вида следует учитывать чувствительность к облучению (т.е. доза, вызывающая минимальные признаки покраснения), устойчивость к высоким температурам и характеристики препаратов сравнения. Существуют модели испытаний с участием пигментированных и не пигментированных животных. Несмотря на то, что не пигментированная кожа имеет тенденцию к большей чувствительности при выявлении фототоксичности, пигментированную кожу также следует рассматривать в качестве модели для испытаний АФИ, в значительной степени связывающихся с меланином (см. Раздел 2.2), если соответствующее воздействие в целевой ткани не может быть обеспечено иным образом.

Если проводится исследование фототоксичности in vivo, желательно иметь некоторую информацию о фармакокинетическом профиле вещества прежде чем разрабатывать исследование. Это необходимо для обеспечения облучения животных при приблизительном Т_макс и для помощи при выборе соответствующей продолжительности исследования относительно предполагаемого клинического воздействия. Соответствующие фармакокинетические данные, если они еще не существуют, должны быть собраны в рамках исследования фототоксичности in vivo.

Несмотря на то, что реакции фототоксичности, как правило, носят острый характер, следует тщательно продумать продолжительность исследований in vivo. Накопление вещества в соответствующих тканях, подвергаемых действию света, после многократного введения может привести к усилению фототоксического ответа. Аналогичным образом, повторное облучение после каждой дозы также может привести к росту фототоксического ответа вследствие накопления поломок. В целом, возможны исследования продолжительностью от одного до нескольких дней, по возможности, используя предполагаемый клинический путь введения. Могут использоваться однократные или многократные ежедневные облучения после дозирования (около Т_макс).

Выбор дозы в рамках доклинических исследований фототоксичности in vivo системных препаратов должны обеспечивать существенную оценку риска для человека. Для таких исследований сочтен целесообразным максимальный уровень дозы, соответствующий рекомендациям для исследований общей токсичности, представленным в Разделе 1.5 ICH M3(R2). Если при максимальной дозе достигается отрицательный результат, испытания при более низких дозах, как правило, не проводятся. Однако в случае, если предполагается положительный результат, могут быть сформированы группы получающих препарат в других дозировках для подтверждения оценки риска на основе NOAEL, как правило, с учетом сравнений С_макс. Группы, в которых применяется несущая основа препарата или необлученные контрольные группы могут помочь выявить фототоксичность, обусловленную веществом, и отличить нежелательные реакции, обусловленные облучением от реакций, не обусловленных облучением. Если максимальное системное воздействие, достигаемое у животных, ниже, чем уровень клинического воздействия, надежность отрицательных результатов при прогнозировании риска для человека ставится под вопрос.

Наиболее чувствительными ранними признаками фототоксичности, индуцированной исследуемым веществом, обычно являются покраснение, а затем – отек при типично субэритемогенной дозе облучения).

Если исследование фототоксичности на животных проводится для системного препарата, поглощающего свет в диапазоне свыше 400 нм, необходимо провести оценку фототоксичности для сетчатки путем детальной гистопатологической оценки. Для веществ, поглощающих свет в диапазоне длин волн ниже 400 нм, оценка сетчатки, как правило, не требуется, поскольку такие волны, как правило, не достигают сетчатки глаза человека и недостаточно глубоко проникают в роговой слой, хрусталик и стекловидное тело.

Достаточная эффективность исследований фототоксичности in vivo , которые, как правило, не подвергают формальной валидации, должна быть подтверждена при помощи соответствующих препаратов сравнения, включая лекарственные средства. Вещества, обладающие фототоксическим действием на человека, представляющие собой различные химические классы и механизмы фототоксичности, должны быть включены в исследование для подтверждения достоверности проведенных анализов. Для анализов фототоксичности сетчатки рекомендуется использовать контрольное вещество с профилем поглощения света в видимом спектре (т.е. выше 400 нм). Одновременное использование положительного контрольного вещества не целесообразно, если анализ in vivo был формально валидирован либо является общепринятым и утвержденным в данной лаборатории.

Испытания фотоаллергичности не рекомендованы для препаратов системного введения. Реакции фотоаллергии у человека после системного ведения возникают редко, и утвержденных доклинических анализов фотоаллергии для препаратов системного введения не существует.

3.5. Испытания фотобезопасности при помощи анализов in vivo и накожного применения

Основные рекомендации при исследовании препаратов системного введения также применимы и к препаратам накожного применения, включая рекомендации по выбору животных для анализа, продолжительности исследования и условиям облучения. Для препаратов накожного применения в целом следует исследовать клинический состав. Следует максимально стремиться к тому, чтобы исследовать при предусмотренных клинических условиях применения. Облучение области нанесения препарата должно происходить в установленное время после нанесения, интервал между нанесением препарата и облучением должен быть обоснован в зависимости от соответствующих свойств исследуемого состава. Признаки фототоксичности следует оценивать в зависимости от соответствующих конечных точек (см. Раздел 3.4). Чувствительность исследуемого препарата следует демонстрировать при помощи соответствующих контрольных веществ. Оценку системной концентрации препаратов в исследованиях фототоксичности накожного применения обычно не проводят.

Для препаратов накожного введения фотоаллергия зачастую оценивалась в доклинических исследованиях наряду с острой фототоксичностью (фотораздражение). Однако формальной валидации подобных анализов не проводилось. Несмотря на то, что острое фотораздражение в подобных исследованиях рассматривалось по отношению к человеку, прогностическая ценность подобных исследований в отношении фотоаллергичности для человека неизвестна. Для регуляторных целей подобные доклинические испытания фотоаллергенности не рекомендованы.

4. Клиническая оценка фотобезопасности

Существуют различные варианты получения данных об опыте применения у человека, начиная от стандартных сообщений о нежелательных явлениях в клинических исследованиях и заканчивая специальными клиническими исследованиями фотобезопасности. Точная стратегия определяется в индивидуальном порядке.

5. Стратегии оценки

Выбор стратегии оценки фотобезопасности зависит от разработчика препарата. В ICH M3(R2) предполагается проводить начальную оценку потенциала фототоксичности на основании фотохимических свойств и фармакологического / химического класса до проведения амбулаторных исследований. Характеристика УФ-видимого спектра абсорбции рекомендована в качестве начальной оценки, поскольку это может привести к устранению необходимости дальнейшей оценки фотобезопасности. Кроме того, можно провести оценку характеристик распределения в тканях кожи и глаза для получения дополнительных сведений о риске для че

Источник