Фармакопейные методы анализа лекарственного растительного сырья

11. Фармакогностический анализ лрс: определение подлинности и доброкачественности.

Фармакогностический анализ – это комплекс методов анализа ЛРС, сырья животного происхождения и их продуктов, устанавливающий его подлинность и доброкачественность по всем параметрам НД.

Подлинность (идентичность) – соответствие исследуемого объекта тому наименованию, под которым оно поступило для анализа. Подлинность (идентичность) исследуемого ЛРС устанавливается путем: 1) макроскопического анализа; 2) микроскопического анализа; 3) качественного химического анализа (качественные реакции); 4) люминесцентного анализа; (во всех случаях проводятся анализы 1 и 2, анализы 3 и 4 выполняются реже).

Доброкачественность – Доброкачественность ЛРС определяется чистотой ЛРС, степенью измельчения (цельного ЛРС), влажностью, содержанием золы и действующих веществ.

Фармакогностический анализ ЛРС складывается из ряда последовательных анализов: товароведческого, макроскопического, микроскопического, фитохимического; в некоторых случаях он дополняется определением биологической активности ЛРС.

Методы определения подлинности ЛРС. Подлинность цельного ЛРС устанавливают в основном на основании макроскопического анализа; измельченного, резано-прессованного, порошкового и брикетированного ЛРС – в результате микроскопического анализа, а также использования люминесцентного метода и гистохимических реакций.

Макроскопический анализ ЛРС – вид фармакопейного анализа, используется для установления подлинности и доброкачественности ЛРС. Эти методики включают определения: 1) внешних признаков, – в частности, формы 2) цвета (определяется при дневном освещении – с поверхности и на изломе); 3) запаха (при растирании ЛРС между пальцами, соскабливании, растирании в ступке); 4) вкуса (неядовитого ЛРС, с разжевыванием и выплевыванием); 5) размеров ЛРС (длины, ширины, диаметра).

Микроскопический анализ – основной метод определения подлинности измельченного ЛРС: резаного, дробленого, порошкованного, резано-прессованного в брикеты и гранулы. Микроскопический анализ ЛРС основывается на знании анатомической структуры растений и заключается в том, чтобы в общей картине анатомического строения различных органов и тканей отыскать характерные диагностические признаки, по которым изучаемый объект можно отличить от анатомических частей другого растения.

Качественный химический анализ (фитохимический анализ) – используется для качественного и количественного определения действующих веществ с помощью химических, физико-химических и других методов. Фитохимические методы используют часто для определения доброкачественности ЛРС. Для установления подлинности ЛРС используют качественные реакции и хроматографию на основные действующие и сопутствующие вещества.Фитохимические реакции, применяемые для установления подлинности ЛРС подразделяют на:а) Качественные химические реакции, для проведения которых готовят водные или водно-спиртовые извлечения из исследуемого сырья. Эффект наблюдают при добавлении соответствующего реактива к полученному извлечению. Для выполнения этих реакций обычно использют пробирки, часовые или предметные стекла с лунками.б) Микрохимические реакции ведут одновременно с микроскопическим анализом ЛРС, наблюдая результаты невооруженным глазом и под микроскопом: такое проведение реакции значительно повышает их чувствительность. в) Гистохимические реакции – реакции, с помощью которых определяют те или иные соединения непосредственно в местах их локализации, то есть на срезах свежего или фиксированного материала. Результаты гистохимических реакций наблюдают под микроскопом вначале при малом, а затем при большом увеличениях. г) Хроматографические методы (в тонком слое сорбента или на бумаге) позволяют не только обнаружить, но и определить качественный состав природных соединений, имеющих диагностическое значение при идентификации определенных видов ЛРС. Есть высокоэффективная хроматография, газовая хроматография, газо-жидкостная хроматография и другие физико-химические хроматографические методы.

Люминесцентный анализ имеет основное достоинство: высокую чувствительность и специфичность. Люминесцентный метод можно использовать при изучении извлеченных веществ (в пробирках, на хроматограмме) и непосредственно в местах их локализации в растительных тканях (люминесцентная микроскопия), то есть одновременно определять отдельные группы природных соединений, способных люминесцировать (например, антраценпроизводные, флавоноиды) и анатомическую структуру ЛРС.

Биологические методы анализа ЛРС: обычно применяются при изучении сердечных гликозидов.

12. Товароведческий анализ ЛРС. Схема анализа. Отбор и анализ ЛРС на наличие амбарных вредителей, микробную загрязненность и токсических веществ. Контроль ЛРС на радиационную безопасность и наличие остаточных количеств пестицидов.

Товароведческий анализ включает правила приемки сырья, регламенти­рует отбор проб для проведения последующих испытаний сырья на содер­жание примесей, степень измельченности, пораженности вредителями, со­держание золы, влаги и действующих веществ.В ходе товароведческого анализа выясняют наличие амбарных вредите­лей, обращают внимание на отсутствие устойчивого постороннего запаха, плесени и гнили, примесей ядовитых растений, помета грызунов и т.д. Отбор проб. Точечные пробы.

Из каждой единицы продукции, отобранной для вскрытия, берут, избегая измельчения, 3 точечные пробы:сверху, снизу и из середины.

Из мешков, тюков и кип точеч­ные пробы отбирают на глубине не менее 10 см рукой сверху, затем, после распарывания по шву, из середины и снизу; то­чечные пробы семян и сухих плодов отбирают зерновым щу­пом.

Из сырья, упакованного в ящик, первую точечную пробу отбирают из верхнего слоя, вторую — после удаления сырья примерно до половины ящика и третью — со дна ящи­ка.

Масса точечных проб не регламентируется, но они должны быть примерно одинаковыми по массе.

Из всех точечных проб, которые складываются на товароведческой доске или на столе с бортиками, осторожно перемешивая, со­ставляют объединенную пробу.

Объединенная проба – это совокупность всех точечных проб, отобранных из партии ЛРС и тщательно (но осторожно) перемешанных между собой.

Все последующие пробы, необходимые для проведения различных ис­пытаний, выделяют методом квартования . Для установления степени зараженности амбарными вре­дителями из объединенной пробы методом квартования вы­деляют пробу массой 500 г для мелких видов сырья и массой 1000 г — для крупных видов сырья.

Эту пробу помещают в плотно закрывающуюся банку, в которую вкладывают эти­кетку.

Из объединенной пробы выделяют также пробы для определения содержания радионуклидов (масса 500-1000 г) и микробиологической чистоты. Из объединенной пробы методом квартования выделяют среднюю пробу. Суть метода квартова­ния состоит в том, что сырье разравнивают на столе или товароведческой доске в виде квадрата по возможности тонким равномерным по толщине слоем и по диагонали делят на 4 треугольника.

Два противоположных треугольника сырья удаляют, а 2 оставшихся соединяют вместе, осторожно перемешивают и вновь разравнивают в виде квадрата.

Эту операцию повторяют до тех пор, пока не останет­ся количество сырья в двух противоположных треугольниках, соответствующее массе средней пробы, указанной в табл. 2, ГФ х1, т.1, стр.270..

Остатки объединенной пробы сырья присоединяют к партии. Допустимые отклонения в массе средней пробы не должны превышать ±10%.

Среднюю пробу упаковывают в полиэтиленовый или много­слойный бумажный мешок. К мешку прикрепляют этикетку, такую же этикетку вкладывают внутрь мешка. На этикетке указывают следующие данные: наименование сырья; наиме­нование поставщика; номер партии;массу партии;дату отбора пробы;

фамилию и должность лица, отобравшего пробу.

Вредители лекарственного растительного сырья и борьба с ними

В процессе транспортирования и при неправильном хранении лекарст­венное сырье, как и другое растительное, может подвергаться порче амбар­ными вредителями. Чаще всего порче подвержено сырье, богатое полисахаридами (крахмалом, инулином), сочные плоды, богатые сахарами, некото­рые сухие плоды и семена, богатые жирным маслом.

Амбарные вредители ухудшают качество сырья, способствуют его само­согреванию, загрязняют сырье, тару, хранилища, оборудование, транспорт­ные средства. К амбарным вредителям относятся клещи, долгоносики, то­чильщики, моль, грызуны.

Большой вред сырью, таре, помещениям для хранения наносят крысы и мыши. Они заражают и загрязняют многие виды сырья, особенно плоды можжевельника и плоды зонтичных.Меры борьбы с вредителями лекарственного сырья могут быть предуп­редительные и истребительные. К предупредительным мерам относятся под­готовка, очистка и обеззараживание складских помещений, перерабатываю­щих предприятий, машин, механизмов, соблюдение санитарно-гигиенических правил хранения лекарственного сырья; к истребительным — физико-механические и химические средства дезинсекции. Дезинсекцию проводят с помощью сероуглерода (реже хлорпикрина). Зараженное сырье помещают в таре в герметически закрывающееся помещение. В разных местах кабины на штабелях с сырьем расставляют плоские чашки, в которые наливают сероуглерод.

Дверь быстро закрывают, щели замазывают алебастром. В га­зовой среде сырье выдерживают от 2 (летом) до 7 (зимой) дней. По истечении этого времени камеру открывают и дают газу улетучиться. Сероугле­род огнеопасен, в связи с чем работа с ним требует особой осторожности.

В летний период для дезинсекции можно использовать солнечную радиа­цию. Сырье, которое не теряет внешнего вида под воздействием солнечных лучей, помещают на темные подстилки и прогревают в течение нескольких часов.

Дератизацию помещений проводят общеизвестными способами. Весьма эффективны для дератизации ловчие бочки.

Мероприятия по борьбе с амбарными вредителями должны быть ком­плексными с соблюдением мер личной и противопожарной безопасности.

Определяют степень зараженности лекарственного растительного сырья амбарными вредителями.

Исследование на наличие амбарных вредителей осуществляют в обязательном порядке при приемке лекарственного расти­тельного сырья, а также ежегодно при хранении. Метод определения степе­ни зараженности сырья амбарными вредителями изложен в ГФ XI (т. 1, с. 276) и ГОСТ 24027.1—80.

Проба для установления степени зараженности вредителями выделяется методом квартования из объединенной пробы мас­сой 500 г для мелких видов сырья и массой 1000 г для крупных видов сырья [ГФ XI (т. 1, с. 269) и ГОСТ 24027.0-80].

.Аналитическую пробу просеивают сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. В сырье, прошедшем сквозь сито, проверяют наличие клещей (лупа х5—10), моли, точильщика и их личинок, живых и мертвых насекомых, подсчитывают их число в сырье, оставшемся на сите.Различают три степени зараженности сырья вредителями: I степень — в 1 кг сырья не более 20 клещей или не более 5 насекомых; II степень — более 20 клещей, свободно передвигающихся по поверхности сырья и не образу­ющих сплошных масс, или 6—10 экземпляров моли, точильщика и их личинок; III степень — клещи образуют сплошные войлочные массы, дви­жение их затруднено, или более 10 экземпляров насекомых в сырье (моль, точильщик, их личинки и др.).

Сырье, зараженное вредителями, после дезинсекции просеивают сквозь сито с отверстиями 0,5 мм (при зараженности клещами) или 3 мм (при зараженности другими вредителями).

После обработки сырье I степени зараженности вредителями может быть допущено к медицинскому применению.

При II степени и в исключитель­ных случаях при III степени зараженности сырье может быть использовано для переработки с целью получения индивидуальных веществ, в остальных случаях сырье уничтожают.

Источник

Контрактное производство

Косметических средств, БАД к пище, фасовка пищевой продукции.

• Вы здесь:
• Возможности
• Качество
• Методики и тесты
• Методы определения подлинности

Методы определения подлинности

Огромное количество лекарственных средств, наводнивших российский фармакологический рынок и рынок БАД, заставляет покупателей с большим подозрением относиться к предмету своего приобретения. Одна из главных задач фармакопейных испытаний на подлинность, является подтверждение с помощью химических реакций, физико-химических испытаний идентичности исследуемого вещества предполагаемому соединению, которое входит в состав заявленного лекарственного средства или биологически активных добавок (БАД) и обозначенного на его этикетке.

В состав всевозможных форм БАД, выпускаемых предприятием ООО «КоролевФарм», входят различные виды сырья: экстракты, витамины, неорганические соединения, растительное сырье. При входном контроле главным показателем качества является определение подлинности сырья.

Для этого в Аналитической лаборатории на участке физико-химических испытаний применяют анализ, представляющий собой совокупность различных методов исследований сырья, изложенных в Государственной фармакопее или другой НД.

Для испытаний на подлинность различных веществ используются общегрупповые реакции совместно со специфичными реакциями, избирательными для определенного вида соединений. Они основаны на установлении физических свойств или измерении физических констант анализируемого вещества.

Подлинность подтверждают, исследуя агрегатное состояние: твердое вещество, газообразное или жидкое.

Определяют окраску, запах, форму кристаллов, гигроскопичность или степень испаряемости на воздухе, устойчивость к воздействию кислорода воздуха и света, степень летучести, подвижности или воспламеняемости.

В основе определения подлинности веществ заложены определенные виды химических реакций: окислительно-восстановительные, осаждения, комплексообразования, этерификации, гидролиза, конденсации, пирохимические и другие.

Подлинность устанавливают химическими методами: идентификацией неорганических веществ (различные реакции на катионы и анионы), идентификацией органических веществ, посредством воздействия на функциональные группы.

Установление подлинности физическими методами: описание физических свойства веществ, определение констант, таких как температура плавления или затвердевания, температура кипения, растворимость, плотность, вязкость.

К физико-химическими методами определения подлинность относят такие методы, как рефрактометрия (определение показателя рефракции), поляриметрия (определение удельного вращения), УФ-спектрофотометрия (анализ спектра вещества, определение удельного и молярного показателя поглощения), ИК-спектроскопия (получение ИК-спектра вещества), потенциометрия (измерение величины рH), тонкослойная хроматография и на бумаге (определение величины Rf).

Для растительного сырья определение подлинности представляет собой комплекс методов исследований растительных форм, представленных в Государственной фармакопее ХI издания или другой НТД (ФС, ФСП, ГОСТ)

Для цельного ЛРС подлинность устанавливают на основании макроскопического анализа, а для резаного, измельченного и порошкового проводят микроскопический анализ.

Макроскопический анализ сырья проводят по статьям ГФ и другим НД.По этим методикам определяют:

внешние признаки: определение типа и формы сырья, строение поверхности исследуют визуально или с помощью лупы с десятикратным увеличением;

цвет: определение проводят используя дневное освещение с поверхности, а для сухого сырья на изломе;

запах: определяют органолептическим методом, растирая сырье руками или в ступке, делая соскоб ножом, некоторое сырье заливают кипятком для усиления запаха;

вкус: распознают очень осторожно, не проглатывая (сырье может быть ядовитое и пробовать его запрещено). Вкус трав, цветов, листьев лучше всего определяется в приготовленном отваре;

размеры (диаметр, длина, ширина): определяют миллиметровой линейкой, проводя несколько измерений, среднее арифметическое этих замеров составляет величину объекта. Размеры мелкие семян, плодов вычисляют путем наложения на миллиметровую бумагу, а округлых семян — просеиванием через сита с определенными размерами отверстий.

При исследовании сырье раскладывают на поверхности, осматривают и сравнивают с подлинным образцом.

Для разнообразных групп сырья используют разные методы исследования.

Листья (Folia). Представляют собой сухие цельные листья или части. Тонкие сморщенные листья в сырье предварительно размачивают путем погружения на несколько минут в кипяток. При помощи иглы и пинцета расправляют их так, чтобы определялись форма листа, край, жилки и черешок. Кожистые листья и мелкие размачивать не надо. Поверхность листа рассматривают с обеих сторон.

Рис.1 Строение цветка

Цветки (Flores). Это отдельные сухие цветки, соцветия или части их. Для определения подлинности такого сырья достаточно рассмотреть внешние признаки визуально, а если необходимо, под микроскопом. Запах, цвет и размеры устанавливают на сухом сырье. Строение цветка изучают, размочив его в горячей воде и, работая двумя иглами, разделяют под лупой, внимательно рассматривая части цветка (рис.1)

Трава (Негbа). Представляет собой высушенные части растений, включающие листья и стебли, на которых могут быть цветки и плоды разной зрелости.

В сухих травах определяют запах и цвет, размер стебля, диаметр цветка или целого соцветия. В размоченных травах смотрят форму листа, как он прикрепляется к стеблю, делают описание формы стебля, рассматривают строение цветка, определяют тип соцветия и плода.

Плоды (Fructus). Бывают истинные и ложные плоды, сборные или сложные, соплодия и их части, собранные после полного вызревания. Форму плодов, поверхность кожуры устанавливают на сухом сырье визуально или под лупой с десятикратным увеличением. Размер мелких плодов определяют, раскладывая их на миллиметровой бумаге.

Рис. 2 Строение семени однодольного растения

Семена (Semina). Семена бывают цельные или отдельные семядоли. Собирают их в период созревания. Семена цельные легко определяют по внешнему виду визуально или под лупой. Нераспознаваемые семена исследуют под микроскопом. Для установления подлинности исследуют форму и поверхность семян. Она может быть гладкой, бугристой или с ячейками, голой или слегка опушенной. Внутри семян располагается зародыш, кожура и содержащийся запас питательных веществ (рис.2) .

Цвет и запах семян устанавливают при растирании или делая соскоб. Размеры семян определяют на миллиметровой бумаге, раскладывая их в ряд, а шарообразные просеивают через сито с ячейками требуемого размера.

Кора (Cortex). Представляет собой наружную часть ветвей, стволов и корней деревьев или кустарников. Подлинность коры по одному только внешнему виду бывает определить очень сложно, поэтому для идентификации применяют микроскопическое исследование. Кора может представлять собой вид трубчатых или плоских кусков, неровных обрезков. Снаружи она может быть гладкой или с поперечными или продолговатыми трещинами. Внутренняя сторона всегда более светлая и ровная. При поперечном надломе край может быть неровный, щетинистый или зернистый и может быть занозистым. На это влияет толщина волокон и наличие каменистых клеток. При определении измеряют максимальный размер толщины коры и ее длину с помощью миллиметровой линейки. С каждой стороны определяют цвет. Вкус устанавливают на сухом сырье, а запах легче уловить, увлажнив его или сделав соскоб.

Рис 3. Проведение микроскопического анализа

Корни, корневища (Radices, Rhizomata). Это высушенные, очищенные, отмытые подземные части многолетних травянистых растений, Их подлинность устанавливают по внешним признакам в натуральном виде или применяя лупу с десятикратным увеличением. Рассматривают форму и характер поверхности корней, определяют цвет, сделав надлом. С помощью микроскопического анализа определяют подлинность измельченного, резаного, порошкообразного, дробленого, прессованного в брикеты и гранулы растительного сырья. Метод основывается на знании анатомии структуры определенных видов растений. Изучая строение различных органов и тканей и, зная их характерные диагностические признаки, можно легко определить подлинность того или иного вида сырья.

Изучаемую часть помещают в каплю жидкости на предметном стекле. Накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом сначала при малом увеличении, а для более детального анализа — при большом увеличении.

Чаще всего для установления подлинности ЛРС проводят качественные реакции или хроматографические пробы на основное вещество, содержащееся в образце или ему сопутствующие. Эти методики представлены в НД на определенные виды сырья в разделе «Качественные реакции».

Для проведения таких реакций из исследуемого сырья готовят водно-спиртовые или водные экстракты, а затем к полученному извлечению добавляют требуемый реактив. По полученной реакции делают вывод о содержании того или иного вещества в анализируемой пробе. Наличие или отсутствие в пробе вещества подтверждает подлинность сырья.

Таким образом, определив подлинность сырья, поступившего в лабораторию для анализа, инженер – химик выдает протокол о соответствии его требованиям НД и передает его в отдел контроля качества. Не прошедшее испытание на подлинность сырье бракуется и в производство не допускается.

Источник